HE 方法与原理大全protocol.docx

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HE染色

准备:60℃烘片2-4h

二甲苯脱蜡1 30min

二甲苯脱蜡2 30min

水化:用乙醇洗去二甲苯,使水能进入细胞和组织二甲苯经过两次100%乙醇可以被完全除去,再经过

水化:用乙醇洗去二甲苯,使水能进入细胞和组织二甲苯经过两次100%乙醇可以被完全除去,再经过95%,85%,75%乙醇使水分逐渐进入组织,以免引起细胞形态结构的改变

95%乙醇3min

85%乙醇3min

75%乙醇3min

(以上步骤同IHC)

自来水冲洗2min(使Harris苏木精易进入核)

苏木精1-3min(根据新旧) 原理:细胞核染色质主要是DNA,双螺旋结构中

磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,易与带正电荷的苏木精,碱性染料相结合

自来水速洗,镜下观察

1%盐酸酒精分化,1-2下 原理:酸能破坏苏木精的醌型结构,使组织与色素

分离而褪色

流水冲洗,反蓝20min 原理:苏木精在酸性条件下呈红色,在碱性条件

下呈蓝色,经盐酸酒精分化后呈红色,因此需要用弱碱性水(0.2%氨水)30秒,使核呈蓝色,自来水也能反蓝,但所需时间较长

伊红(醇溶性)1-2min 原理:伊红是酸性染料,细胞浆蛋白质为两性化

合物,染液的PH在蛋白质等电点(4.7-5)以下时,碱式电离,细胞浆带正电荷,可被带负电荷的酸性染料结合

自来水速洗(防止伊红带入乙醇),镜下观察

75%乙醇3min(为避免组织过度收缩,乙醇应从低浓度开始依次增加浓度)

85%乙醇3minx2

95%乙醇2minx2

100%乙醇5minx2

(伊红染色过深可适当延长在乙醇中的时间,反之缩短)

二甲苯1 10min

二甲苯2 10min

中性树脂封片

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