动物病理生理学实验设计之肝性黄疸.pptVIP

肝性黄疸;实验目的;实验目的;实验原理;实验动物;·5ml注射器、试管、试管架、离心管、离心机、移液管、一般手术器材

·150mg新生霉素、生理盐水、重氮试剂、95%酒精、各种浓度重铬酸钾溶液标准管;·实验前处理及病理模型复制

·实验检查

;（1）实验前两天给小鼠禁水

（2）实验前一天将0.1g新生霉素溶100ml水中并将其加入实验组小鼠的饮水，对照组小鼠回复正常饮水。

（3）实验前一天将50mg新生霉素溶于5ml水中配成新生霉素溶液，给实验组小鼠注射两次，每次1ml，剩余保存留用。对照组小鼠注射等量的生理盐水。

（4）给实验小鼠注射1ml新生霉素溶液，造成肝细胞损伤。对照组小鼠注射等量的生理盐水。

;（1）观察记录动物的一般状态和巩膜，口腔黏膜，耳及皮肤的颜色。

（2）摘除眼球采血1-1.5ml，放入干燥离心管内，凝血后离心（2000/分），分离血清，进行胆红素定性和黄疸指数检查。

;·原理

胆红素与重氮试剂作用发生重氮反应，形成红色的重氮胆红素。因血浆中的结合胆红素可以溶于水，与重氮试剂作用后呈现红色，称为直接反应阳性；游离胆红素因不能与重氮试剂直接作用，故呈阴性反应，但加乙醇后游离胆红素则能与重氮试剂作用，呈现阳性反应，称为间接反应阳性。

;

·方法

取血清0.2ml放入小试管内，沿管壁加入新配制的重氮试剂0.5ml，立即计时和进行观察。若在30s-10min内试剂与血清交界处出现紫红色环，为直接反应阳性；若经10min仍不显色，而加入95%酒精0.2ml后才显色者，则为间接反应阳性。

;

·重氮试剂配制

甲液：取对-氨苯磺酸1g，浓盐酸15ml，加蒸馏水至1000ml。

乙液：取50%亚硝酸钠液（亚硝酸钠25g，加蒸馏水至50ml时，置冰箱中保存）0.5ml，再加蒸馏水50ml，此液可用1周。

临用前，取甲液5ml，加乙液0.15ml混合，在3h内有效。

。

;·原理

血清黄色的深浅与胆红素含量有关。临床检验规定0.01%重铬酸钾溶液的色度作为黄疸指数1，将血清用生理盐水稀释，肉眼观察其黄色深度与0.01%重铬酸钾溶液相当时，血清的稀释倍数即为该血清的黄疸指数。

;·方法

取血清0.1ml置于小试管内，所用试管应与标准管口径及厚度一致，用1ml吸管吸取生理盐水溶液稀释血清，当与某一标准管的颜色相同时，计量所用生理盐水毫升数，再按公式求出黄疸指数单位：

所用生理盐水毫升数+0.1

黄疸指数=×标准管单位

0.1

;·黄疸指数标准管制备

0.1%重铬酸钾溶液：精确称取重铬酸钾（A.R.）0.1g，置于100ml容量瓶内，加蒸馏水约90ml使其溶解，加浓硫酸0.1ml，再加蒸馏水至100ml。取10ml试管10只，按下表操作：;（1）实验组小鼠可能出现呼吸抑制，腹泻、昏迷、体温下降、肌肉抽搐、僵直等症状，排便颜色较淡或有恶臭。

（2）巩膜，口腔黏膜，耳及皮肤呈现黄色。

（3）胆红素定性试验呈间接反应阳性

（4）黄疸指数

;谢谢大家！