蛋白质测序分离及提纯.pptVIP

2.7.2蛋白质纯化总目标：增加制品纯度或比活1.前处理：因动/植物/细菌而异2.粗分级分离：采用盐析/等电点沉淀/有机溶剂分级分离等方法3.细分级分离：采用凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等4.结晶第30页,共53页，2024年2月25日，星期天（一）利用溶解度差别的分离方法1.等电点沉淀和pH控制当蛋白质处于等电点pH值，蛋白质的净电荷为零，由于相邻蛋白质分子之间没有斥力而趋向于凝聚而沉淀。不同蛋白质具有不同的等电点，利用蛋白质在等电点时溶解度最低的理可以把蛋白质混合物分离开来。蛋白质混合物的分离纯化方法第31页,共53页，2024年2月25日，星期天2.蛋白质的盐溶和盐析中性盐对蛋白质有明显的溶解度影响。在低浓度时，中性盐增加蛋白质的溶解度，这种现象称盐溶。盐溶主要由于蛋白质分子吸附某种盐类离子后，带电表层使蛋白质彼此排斥，而蛋白质分子与水分子之间的相互作用却加强。盐析：在蛋白质溶液中大量加入中性盐使水的活度降低，原来溶液中大部分自由水转变为盐离子的水化水，从而降低蛋白质极性基团与水分子之间的相互作用，破坏蛋白质分子表面的水化层。第32页,共53页，2024年2月25日，星期天3.有机溶剂分级法有机溶剂之所以能使酶沉淀析出。主要是由于有机溶剂的存在会使溶液的介电常数降低。