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食品分析沈阳农业大学

食品的PCR基因扩增技术第十一章

1PCR技术的检测原理2PCR反应条件与程序优化3PCR扩增产物的检测分析4PCR技木在食品中的应用

PCR技术的检测原理一

PCR（Polymerasechainreaction）的定义：聚合酶链反应，又称体外DNA扩增技术。在模板DNA、引物（模板两端的已知序列）和四种脱氧核苷酸存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应。

1、模板DNA变性加热（90～95℃）使双螺旋结构的氢键断裂,双链解开成为单链，称为DNA的变性。G-C含量高解链温度高

2、模板DNA与引物的退火（复性）将反应混合物降温至55℃,使寡核苷酸引物与单链DNA模板（或从mRNA逆转录而来的cDNA）上互补的序列复性,形成模板—引物复合物，即退火。

3、引物的延伸升高反应体系温度至72℃，以4种dNTP（脱氧核糖核苷三磷酸）为原料，在DNA聚合酶作用下，从引物的3’-OH端延伸，以变性后的单链DNA为模板，合成出5’→3’的互补链。

上述3步为一个循环，每经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，经过25~40个循环后DNA可扩增106~109倍。

PCR的反应动力学指数期：反应初期，靶序列DNA片段的