食品微生物检验：食品微生物检验基础.pptxVIP

食品微生物检验基础;Contents;第一节 细菌学检验基础;一、无菌技术;（一）什么是无菌技术

指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。;（二）无菌环境;1、无菌室;2、超净工作台;（三）无菌器材;（四）无菌操作

1、目的：

是保证待检物品不被环境中微生物的污染；

是防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。;2、进入无菌室前的准备;3、检验操作过程的无菌操作要求;;2.试管前端过火;4.试管倾斜，放入接种环;;;;;;;1.试管前端过火;;无菌操作;操作时离酒精灯外焰区太远;无菌操作–错误示范;无菌操作–错误示范;注意事項–生物性废弃物;二、微生物的接种与分离技术;（一）接种;１、接种工具和方法;2.常用的接种方法有以下几种：;５）涂布接种６）液体接种７）注射接种８）活体接种;;;２.涂布平板法;３.平板划线法;平板划线法：

1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。

2、划线方法;三、细菌培养方法

由于细菌的种类不同，对培养条件的要求也就不同，细菌对培养条件的要求包括温度和气体。由于大多数细菌所需的温度均是35～37℃，所以细菌的培养方法仅以细菌对气体需求不同进行分类。据此可将细菌培养分为三种，即需氧培养法、CO2培养法、厌氧培养法。;;;二氧化碳培养箱;2．烛缸法

此法是将已接种的培养基，置于一定体积的磨口干燥缸内，在缸盖口均匀涂上少许凡士林，在缸内同时放入点燃的蜡烛，然后盖严缸盖，蜡烛经几分钟后因缸中氧气减少而自行熄灭，此时缸中的CO2含量约为5％～10％，再将干燥缸放入35℃孵箱中培养即可。;二氧化碳培养法;3．化学法

常用的方法为碳酸氢钠-盐酸法，利用每升容积0.35ml盐酸与0.4g碳酸氢钠接触生成CO2的化学原理产生CO2，以供细菌生长。;(三)厌氧培养法

厌氧菌由于对氧敏感，在其分离、鉴定以及研究等的过程中，必须为之营造一个低氧化还原电势的厌氧环境，否则厌氧菌就不能生长甚至死亡，因此厌氧环境对于厌氧菌的生长繁殖至关重要。如在液体培养基的表面加盖凡士林或蜡，或在液体培养基中加入碎肉块制成疱肉培养基等。此外，也可以利用物理或化学方法除去培养环境中的氧，以保证厌氧环境。;厌氧培养箱;;菌落形状：圆形、不整形、扁平、凸起、凹面菌落大小：以mm计算。

表面性状：光滑、粗糙、有无光泽等。边缘情况：整齐、不整齐、锯齿状等。

颜 色：无色、白色、黄色、灰色等。透明度：不透明、透明、半透明等。质 地：硬、软、脂状、磨状等。

粘 度：奶油状、黏液状、膜状易碎等。

乳化性：指在生理盐水中，将一菌落在盐水中研磨形成均匀乳状或颗粒状的程度。;菌落形态学

BacterialColonyMorphology;;;单增李斯特氏菌在普通计数琼脂平板上的菌落;2．细菌在鉴定培养基上的特征;双环：菌落周围完全溶解的晕圈外有一部分溶血的圆圈。;(2)卵黄琼脂中的反应：

此培养基用于检查细菌是否产生卵磷脂酶和脂酶，前者是在菌落周围出现一沉淀环，后者则是出现“珍珠包膜”，即在菌落周围出现“珍珠层”，通过反射光可见菌落周围有一层闪光膜。;菌落;菌落周围无混浊白环;(3)蛋白水解作用：在菌落周围出现清晰的环。

(4)色素：细菌在生长过程中可产生色素。

水溶性色素溶在培养基中，使培养基着色，如绿脓色素、荧光色素等；

脂溶性色素则使细菌菌落着上颜色，如金黄色葡萄球菌的金黄色菌落。;（5）气味：有些细菌在生长过程中可产生气味，有助于细菌的鉴定。

能产生特殊气味的细菌有：假单胞菌属细菌可产生葡萄汁气味；变形杆菌产生巧克力烧焦的臭味；链球菌产生地窖里的霉臭；梭菌可产生粪臭、腐败味；产黑色素类杆菌属细菌产生辛辣味等。;;;液体培养物的观察;(三)细菌在半固体培养基中的生长现象;斜面培养物的观察;五、细菌的生化反应检查法

由于细菌各自的酶系统不同，新陈代谢的产物也有所不同，而这些产物又各具有不同的生物化学特性。为此，可利用生物化学的方法来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的细菌，这种试验称为细菌的生化反应试验。;在培养物中加入某种底物与指示剂，经接种、培养后，观察培养基的PH值变化。

在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。

根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。

根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。;生化试验的注意事项;（一）糖类代谢试验

（二）氨基酸和蛋白质代谢试验

（三）有机酸盐和铵盐代谢试验

（四）酶类试验;;常用的糖、醇;方法;;结果

(1)接种的细菌，如能分解培养基中的糖(醇)类而生成酸，由于培养基内加有指示剂，故可使培养基中的指示剂呈酸性反应，如产生气体，则可使半固体培养基内或液体培养基中