蛋白质共价结构-生物化学-PPT.pptVIP

（1）二硝基氟苯（DNFB）法

Sanger法。2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNP）。在酸性条件下水解，得到黄色DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚抽提分离。不同的DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。（2）丹磺酰氯（DNS）法在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以与N-端氨基酸的游离氨基作用，得到丹磺酰-氨基酸。此法的优点是丹磺酰-氨基酸有很强的荧光性质，检测灵敏度可以达到1?10-9mol。灵敏度比DNFB法高100倍水解后的DNS-氨基酸不需要提取，可直接用纸电泳或薄层层析加以鉴定。（3）苯异硫氰酸酯（PTC）法多肽或蛋白质的末端氨基能与PITC作用，生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质（PTC-多肽或蛋白质），它们在酸性有机溶剂中加热时，N末端的PTC-氨基酸发生环化，生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上脱离。脱去N末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。重复反应可以用来测定氨基酸顺序。（4）氨肽酶法氨肽酶是一类肽链外切酶，它能从多肽链的N端逐个地切下氨基酸。根据不同的反应时间测出酶水解所释放的氨基酸种类和数量，按反应时间和残基释放量作动力学曲线，就能知道该蛋白质的N末端残基顺序。最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解以亮氨酸残基为N-末端的肽键速度最大。C－末端测定的方法肼解法；还原法；羧肽酶法（1）肼解法是目前测定C末端残基最重要的化学方法。多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物。肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。（2）还原法肽链C末端氨基酸也可用硼氢化鋰还原成相应的a-氨基醇。肽链完全水解后，代表原来C末端的a-氨基醇，可用层析法加以鉴别。（3）羧肽酶法羧肽酶是一种肽外切酶，它能从多肽链C-端逐个水解。根据不同的反应时间测酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，从而知道蛋白质的C-末端残基顺序。目前常用的羧肽酶有四种：A,B,C和Y；A和B来自胰脏；C来自柑桔叶；Y来自面包酵母。羧肽酶A能水解除Pro,Arg和Lys以外的所有C-末端氨基酸残基；B只能水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键。蛋白质共价结构-生物化学蛋白质共价结构内容提要重点：肽的结构和性质掌握：肽段中氨基酸序列的测定方法了解：肽和蛋白质的人工合成§4-1蛋白质通论蛋白质概念蛋白质的化学组成蛋白质的分类蛋白质的大小和分子量蛋白质的构象蛋白质功能的多样性蛋白质氨基酸顺序的遗传编码一、蛋白质概念蛋白质是由20种a-氨基酸通过肽键组成的高分子有机物.二、蛋白质的化学组成蛋白质由C、H、O、N四种元素组成，多数含有S，有的含有微量铁、铜、锌、碘和磷等元素。各种蛋白质的含氮量都接近于16％蛋白质含量=蛋白氮?6.256.25为蛋白质系数，即1克氮所代表的蛋白质量（克数）凯氏（Kjedahl）定氮法测定蛋白质含量的基础。碳50％-55%氢6.5-7.3％氧19-24％氮16%硫0-3％其他微量三、蛋白质的分类蛋白质分子形状：球状蛋白质：globularprotein对称性好，溶解度高，能结晶，多数蛋白质属于此类；纤维状蛋白质：fibrousprotein对称性差，分为：可溶性纤维状蛋白质（肌球蛋白）；不溶性纤维状蛋白质（胶原蛋白、丝心蛋白等）。蛋白质分子组成：简单蛋白质：(simpleprotein)完全由氨基酸构成，如胰岛素；结合蛋白质：(conjugatedprotein)由蛋白质和辅基组成，如血红蛋白等。生物功能：酶、结构蛋白、防御蛋白等。四、蛋白质的大小和分子量分子量变化范围从大约6,000到1,000,000道尔顿(dation)或更大。蛋白质分子量的上下限是人为规定的。在表示蛋白质分子量时应说明测定方法(层析、电泳、质谱）。有些寡聚蛋白质的分子量高达数百万甚至数千万，例如烟草花叶病毒（TMV），“分子量”约4×107。大家应该也有点累了，稍作休息大家有疑问的，可以询问和交流五、蛋白质的构象肽链形成的蛋白质的特有的空间结构即为蛋白质的构象。如蛋白质二级结构：a-螺旋、β-折叠等。六、蛋白质功能的多样性作为有机体新陈代谢的催化剂（酶）。生物体的结构成分(胶元蛋白)。贮藏功能（作为生物体养料和胚胎或幼儿生长发育的原料。）运输功能（血红蛋白）。运动功能（肌动蛋白和肌球蛋白）调节功能（激素）参与高等动物的免疫反应（抗体和免疫蛋白）。控制或调节