新版生物芯片技术省公开课一等奖全国示范课微课金奖PPT课件.pptxVIP

生物芯片技术宋艳斌第1页了解生物芯片功效，及其医学研究领域中作用，以及生物芯片技术最新进展。熟悉生物芯片种类及其作用，基因芯片、蛋白芯片和微缩芯片试验室原理及其制备方法。掌握基因芯片工作原理、制备方法及其在临床诊疗中意义。第2页第一节生物芯片概述第二节基因芯片第三节蛋白芯片第四节芯片试验室第3页第一节生物芯片概述一、生物芯片定义二、生物芯片特点及分类三、生物芯片在医学中应用概况与前景第4页一、生物芯片定义指在一块大不上不等（普通约1－2cm2）载体材料上，以大规模阵列形式排布了不一样生物分子探针，形成可与目标靶分子相互作用，并行反应固相表面。将芯片与荧光标识靶分子进行化学反应（如杂交、免疫反应等），经过激发光扫描后，不一样反应强度标识荧光将展现不一样荧光发射谱征。用激光共聚焦显微扫描仪或CCD相机搜集信号后，经计算机分析数据结果，从而取得相关生物信息。第5页二、生物芯片特点高通量、集成化、并行化和微型化第6页生物芯片分类第7页三、生物芯片在医学中应用分子生物学、生物进化（生物起源及新物种判定）生物医学（新药筛选与合成，疾病诊疗和治疗，如癌症、早年性痴呆症等病因研究）农林科学（农作物育种改良、食品卫生监督、微生物检测）环境科学生化武器侦检司法判定等第8页第二节基因芯片一、基因芯片原理二、基因芯片技术三、基因芯片应用第9页基因芯片(genechip)又称DNA芯片(DNAchip)或DNA微阵列(DNAmicro-array)。基因是载有生物体遗传信息基本单位，存在于细胞染色体上。将大量基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纤维膜等载体上，称之为基因芯片。第10页基因芯片发展历史SouthernNorthernBlotDotBlotMacroarrayMicroarray第11页一、基因芯片原理基因芯片技术是建立在基因探针和杂交测序技术上一个高效、快速核酸序列分析伎俩。基因芯片技术主要包含四个主要步骤：芯片制备、样品制备、杂交反应和信号检测以及结果分析。第12页基因芯片研制总体蓝图第13页图11-1基因芯片技术主要步骤第14页二、基因芯片技术（一）芯片制备1.合成探针基因组探针cDNA探针寡核苷酸探针第15页2.探针在载体表面固定固相载体固体片状：主要有玻片、硅片和瓷片等；薄膜状：有硝酸纤维素膜、尼龙膜以及聚丙烯膜等。第16页探针在载体表面固定可分为两大类方法：合成后点样，多用于大片段DNA，有时也用于寡核苷酸，甚至mRNA。原位合成（即在支持物表面原位合成寡核苷酸探针），适合用于寡核苷酸。第17页合成后点样接触式点样非接触式点样第18页Cartesian-PixSysSeries第19页合成后点样板-CartesianTech.第20页原位合成有三种路径：原位光刻合成压电打印法分子印章原位合成法。第21页原位光刻合成技术原理示意图第22页压电打印原位合成法工作方式第23页（二）样品制备常见基因芯片试验样品有DNA、mRNA(cDNA)两种。依据样品起源、基因含量及检测方法和分析目标不一样，采取基因分离、扩增及标识方法各异。第24页（三）杂交反应杂交反应是荧光标识样品与芯片上探针进行反应产生一系列信息过程。过程类似于普通杂交法。把要杂交分子溶液覆盖芯片探针，用盖玻片覆盖，即可杂交。第25页（四）信号检测和分析在杂交反应完成后，将矩阵插入扫描仪中。主要为荧光法，其重复性很好，不足是灵敏度仍较低。当前正在发展方法有质谱法、化学发光法、光导纤维法等。第26页BED放大器BA数模转换器C计算机基因芯片杂交结果要用专用扫描系统读取。A:激光器B:滤光片C:二色镜D:反光镜E:关栅第27页基因芯片扫描结果不一样颜色代表一个探针点杂交上带荧光标识核酸分子数差异。红〉黄〉绿〉兰〉紫第28页GENERALSCANNING-ScanArraySystem第29页三、基因芯片应用（一）寻找和发觉新基因（二）基因表示分析（三）DNA序列测定与序列间比较（四）突变体和多态性检测第30页表示谱芯片实例PCR法从外周血淋巴细胞cDNA文库扩增产物扩增产物点样于包被玻片上未处理细胞cDNA热击T细胞cDNADNA芯片杂交杂交激光共聚焦扫描发觉17个差异表示基因,11个被热诱导,6个被热抑制,发觉其中3个为未发觉新基因第31页（五）在疾病诊疗应用（1）感染性疾病诊疗性传输疾病、肝炎等。（2）遗传性疾病诊疗地中海贫血、婚前检验等。（3）耐药性检测结核分支杆菌耐药性检测芯片等。第32页生物芯片优、缺点优点：1）高通量性：可同时并行分析成千上万种分子。节约时间。2）微型化，试验所需试剂用量少。3）高