几种常见的高效液相色谱法.ppt

常见的几种色谱方法14.1液-固吸附色谱14.2液-液分配色谱14.3离子交换色谱14.4离子对色谱14.5排阻色谱14.6亲和色谱等温吸附线与色谱峰形：14.2液-液分配色谱14.3离子交换色谱基本原理14.4离子对色谱ionpairchromatography基本原理：14.5排阻色谱

size-exclusionchromatography基本原理：基本原理：14.6亲和色谱(AC)Affinitychromatograph1.液-固吸附分离固定相（3）化学键合固定相化学键合固定相的特点：3.离子交换色谱分离固定相4.空间排阻分离固定相14.3液相色谱的流动相2.流动相类别3.流动相选择4.选择流动相时应注意的几个问题*14.1液-固吸附色谱固定相：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂。流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。基本原理：流动相中的溶质分子（X）与溶剂分子（S）在固定相吸附剂上的竞争吸附：Xm+nSa=Xa+nSm下标m、a分别表示流动相和固定相，n是被吸附的溶剂分子数。达到吸附平衡时，吸附平衡常数（K）可表示为：K?分配系数，但K值大，表明该溶质分子在固定相上被吸附得多，吸附作用强，该组分的保留时间长，分配系数也大。吸附平衡常数K可以由吸附等温线数据求出。拖尾峰(凸形等温吸附线)：被吸附分子首先占据强吸附力的点。低浓度时，主要被强吸附力的点吸附，保留时间长。浓度高时，较多溶质分子被吸附力弱的点吸附，造成色谱峰中心部分运动速率较快，峰前移，而后沿部分吸附力相对较强，运动速率较慢，形成拖尾峰。液-固吸附分离模式适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。固定相与流动相互不相溶。基本原理：组分在固定相和流动相上的分配。流动相：亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性(正相normalphase)，反之流动相的极性大于固定液的极性(反相reversephase)。正相与反相的出峰顺序相反。固定相：早期涂渍固定液，现已不采用。化学键合固定相：将基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上，如C18柱（反相柱）。固定相：阴离子交换树脂或阳离子离子交换树脂。流动相：阴离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶。平衡时，平衡常数为对于磺酸型阳离子交换树脂，一价阳离子的KB/A值顺序：Cs+Rb+K+NH4+Na+H+Li+二价阳离子的KB/A值顺序：Ba2+Pb2+Sr2+Ca2+Cd2+Cu2+对于季胺型阴离子交换树脂，一价阴离子的KB/A值顺序：ClO4-I-HSO4-SCN-NO3-Br-NO2-CN-Cl-BrO3-OH-HCO3-H2PO4-IO3-CH3COO-F-将一种(或多种)与溶质离子电荷相反的离子(对离子或反离子)，加到流动相中与溶质离子结合形成疏水性离子对，能够在两相之间进行分配。阴离子分离：对离子常用烷基铵类，如氢氧化十六烷基三甲胺。阳离子分离：对离子常用烷基磺酸(己烷磺酸钠)。反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C18柱)，含有对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+X-。形成的离子对化合物X+Y-，在两相间进行分配：X+水相+Y-水相=X+Y-有机相平衡常数：溶质在两相间的分配系数DX为：不同待测离子与反离子形成离子对的能力不同，分配系数存在差异，导致在固定相中滞留时间不同，从而实现色谱分离。离子对的容量因子k可表示为：则组分的保留时间：保留值随KXY和[Y-]水相的增大而延长，而KXY取决于对离子和有机相的性质，则控制流动相中加入的对离子特性和浓度可以调整组分保留时间，达到提高色