仪器分析高效液相色谱法.pptx

高效液相色谱法;1903年俄国植物化学家茨维特（Tswett）首次提出“色谱法”和“色谱图”的概念。茨维特使用色谱法来描述他的彩色试验。他在论文中写到：“一植物色素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样，称之为色谱图。”

1930年以后，相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术。

1952年，英国学者Martin和Synge基于他们在分配色谱方面的研究工作，提出了关于气－液分配色谱的比较完整的理论和方法，把色谱技术向前推进了一大步，这是气相色谱在此后的十多年间发展十分迅速的原因。;1958年，基于Moore和Stein的工作，离子交换色谱的仪器化导致了氨基酸分析仪的出现，这是近代液相色谱的一个重要尝试，但分离效率尚不理想。

1960年中后期，气相色谱理论和实践发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱又开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。

1970年中期以后，微处理机技术用于液相色谱，进一步提高了仪器的自动化水平和分析精度。

1990年以后，生物工程和生命科学在国际和国内的迅速发展，为高效液相色谱技术提出了更多、更新的分离、纯化、制备的课题，如人类基因组计划，蛋白质组学有HPLC作预分离等。

;高效液相色谱法测定防腐剂的含量

;;实验部分

;1.2 全部药品除特别注明外均为分析纯实验用水为蒸馏水,溶液为水溶液,苯甲酸(1mgPmL)标液,盐酸(1+1),酸性氯化钠溶液(4%),无水Na2SO4,甲醇(经滤膜0.5μm过滤),乙酸铵溶液(0.02mol/L)(经0.5μm滤膜过滤)

;;标准曲线的制作

配制不同浓度的苯甲酸标准溶液系列,以甲醇+乙酸铵溶液(5∶95)为流动相(预先在超声仪中超声混合均匀),进样10μL,根据苯甲酸的峰面积对苯甲酸的浓度绘制标准曲线,外标定量.

;样品的处理及测定

准确称取酱油样品5.0g,置入150mL带塞分液漏斗中,加0.5mLHCl(1+1)5mL酸化,用15mL,10mL乙醚充分振荡,提取两次,将上层清液(提取液)吸入另一个150mL带???分液漏斗中,合并乙醚提取液,用4%酸化NaCl溶液洗涤两次,然后再用无水Na2SO42g加入以吸收其中水量,将乙醚提取液分液至干净烧杯中,用40℃水浴挥发至干,蒸留物溶于甲醇中,定容25mL.进样10μl,HPLC测定.以苯甲酸的峰面积求得其含量。

;不同生产厂家的酱油样品的测定

按同样的处理方式对不同生产厂家的酱油样品进行处理和测定,结果如下;;高效液相色谱法特点：三高一少二广;经典液相色谱

;HPLC与GC差别;高效液相色谱法类型;正相键合相色谱法;反相键合相色谱法;常用固定相和流动相;化学键合相是利用化学反应通过共价键将有机分子键合在载体（硅胶）表面，形成均一、牢固的单分子薄层而构成的固定相。

1、化学键相合类型Si-N、Si-C、Si-O-C、Si-O-Si-C(稳定性好，容易制备)

2、键合相优点

（1）使用过程中不流失，耐溶剂冲洗

（2）化学性能稳定，柱子不“娇”，一般在PH2~8的溶液中不变质

（3）热稳定性好

（4）载样量大

（5）适合做梯度洗脱;常用流动相及其选择;高效液相色谱仪;;1．高压输液系统（驱动流动相和样品通过色谱分离柱和检测系统）

固定相颗粒极细，对流动相阻力很大，配备有高压输液系统。一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成。

（1）流量稳定、无脉动，流量精度和重复性在1~2%左右；

（2）流量范围宽，且连续可调，一般在0.01~10mLmin-1之间，制备型仪器能达到100mLmin-1

（3）输出压力高、密封性好，要求最高压力300~500kg/cm2；

（4）耐腐蚀，能适用于各种有机溶剂、水和缓冲溶液；

（5）操作、更换溶剂方便，易于清洗和维修，容易实现梯度淋洗和流量程序控制等。;2．进样系统（将待分析样品引入色谱系统）;3、分离系统——色谱柱（分离样品中的各个物质）

色谱柱分离系统包括保护柱、色谱柱、柱温箱、柱切换阀等。

;高效液相色谱条件选择;;高效液相色谱随着实验方法的大量开发和成熟，目前应用领域非常广泛。

高校：食品、生命、环境、药学等相关专业用的较多

制药