DNA提取过程中各种试剂的作用及原理12 - 生物学.docx

，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。注应保证一定的转速和时间针对不同材料的特点,

，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。注

应保证一定的转速和时间针对不同材料的特点,在提取过程中辅以相应的去杂质的方法基因组DNA的提取核酸分

淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作

DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀,再加KAc使这些复合物转变为溶解度

(完整)DNA提取过程中各种试剂的作用及原理

DNA提取过程中各种试剂的作用及原理

1．溶液I—溶菌液：

溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β—1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。

葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解.

EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）；（2）EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境.2．溶液II－NaOSDS液：

NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。但当pH＞12或pH＜3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。在溶液II中的NaOH浓度为0。2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12。6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。

SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：

（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。

（2）解聚细胞中的核蛋白。

（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O—SO3R＋—蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中

(用RNase去除RNA时)受到干扰。

3。溶液III——3mol／LNaAc（pH4.8）溶液：NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4。8，必须加入大量的冰醋酸。

核酸酶降解核糖核酸后,为什么再要用SDS

核酸酶降解核糖核酸后,为什么再要用SDS与KAc来处理？加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化

度的NaAc或NaCl,使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互

是使蛋白变性并有助于液相与有机相的分开，异戊醇的作用是消除抽提过程中出现的泡沫。氯仿是强蛋白质变性剂

沉淀RNA吸附或沉淀后应用70％的乙醇洗涤，以除去盐离子等若长期储存建议使用TE缓冲液溶解TE中的E

(完整)DNA提取过程中各种试剂的作用及原理

所以该溶液实际上是NaAc—HAc的缓冲液。用pH4。8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性，

使变性的质粒DNA能够复性,并能稳定存在。而高盐的3mol／LNaAc有利于变性的大分子染色体DNA、

RNA以及SDS白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和核酸上的电荷,减少相斥力而互相聚合，后者是因为钠盐与SDS－蛋白复合物作用后，能形成较小的钠盐形式复合物，使沉淀更完全。

4．为什么用无水乙醇沉淀DN

用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，

乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。

DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67%左右.

因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵）。

但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率.折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，

最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0。6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。