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脱氢酶活性测定实验报告
TTC标准曲线的绘制:
32
0.312400.456TTC浓度
32
0.312
40
0.456
吸光值A0.041 0.186 0.298
TTC标准曲线
—吸光值A一线性（吸光值A）y=0.的56x3.0282
R”=0.9521
16
32
40TTC谎度（ug/nL）
土壤脱氢酶的吸光值记录:
编号
1
2
3
平均
吸光值A
0.145
0.167
0.186
0.166
由标准曲线可得相应TTC浓度为：2.0314ug/mL
则土壤脱氢酶活性=ABC
=2.0314*18*1
=36.5652
式中：A为查出的TTC浓度(ug/mL)；B为培养时间校正值(18h);C为比色时稀释倍数⑴。
思考题:
1.影响脱氢酶活性的因素有哪些？
答：pH：每种酶都有最适pH,在此pH下，酶活性最大；
温度：酶活性随着温度的升高而增加，在最适温度时达到最高值，然
后开始下降；
激活剂：可以促进酶活性；
抑制剂：会使酶活性降低;
还有内因如底物浓度和酶浓度。
2?已知乳酸脱氢酶（LDH）在NAD+的递氢作用下，使乳酸脱氢生成丙酮酸。丙酮酸在碱性溶液中与2,4-二硝基苯肌生成2,4-二硝基苯踪使溶液呈蓝色。颜色的深浅与丙酮酸浓度成正比。请设计一个测定动物肝脏乳酸脱氢酶活性的实验。
答：1,校正曲线的制作：（1）按下表操作：
加入物（ml）
B
1
2
3
4
5
丙酮酸标准液
0
0.025
0.05
0.1
0.15
0.2
底物缓冲液
0.5
0.475
0.45
0.4
0.35
0.3
去离子水
0.11
0.11
0.11
0.11
0.11
0.11
二硝基苯肺
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
NaOH
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
相当于金氏单位
0
125
250
500
750
1000
（2）37度水浴15分钟，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm,用B管调零，读取各管吸光度。以吸光度值为纵坐标，相应的酶活性单位为横坐标绘制校正曲线。
2,酶活性的测定：
2,酶活性的测定：
（1）
加入物（ml）
血清
NAD+底物缓冲液
（37度水浴5min）
NAD+溶液
（37度水浴15min）
2,4二硝基苯肺
NAD+溶液
（37度水浴15分钟）
0.4mol/L溶液
测定管对照管
0.01 0.01
0.5 0.5
0.1 -
0.5 0.5
- 0.1
5.0 5.0
(2)
比色杯光径为1.0cm,用蒸镭水调混匀，室温放置5min后，于440nm
比色杯光径为1.0cm,用蒸镭水调
单位定义：以100ml血清，37度，作用底物15min,产生lumol丙酮酸为一个金氏
单位。
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