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临床检验技师考试辅导临床免疫学和免疫检验

第三章免疫和抗血清的制备

第一节免疫的制备

免疫指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应

的物质。

一、颗粒性抗的制备

细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒性抗。

细胞抗（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。

细菌抗多用液体或固体培养物，经集菌后处理。

颗粒性抗大多用静脉内注射免疫法。

二、可溶性抗的制备和纯化

（一）组织和可溶性抗的粗提

蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗。

1.组织匀浆的制备通常需要先将来源于人和动物的组织和细胞破碎，再经一定的方法纯化，才能获

得所需的抗。细胞破碎方法有：

（1）高速组织捣碎机法；

（2）研磨法：组织匀浆液要离心沉淀，沉淀物为组织和细胞碎片，上清液为提取可溶性抗的材料。

2.细胞的破碎除上述机械捣碎获取外，尚有酶处理法，常用胃蛋白酶或胰酶，可获得游离的单个细

胞。

细胞抗分膜蛋白抗、细胞质抗（主要为细胞器）、细胞核与核膜抗，制备这些抗前均需将

细胞破碎，方法有：

（1）反复冻融法：-20℃冷冻，30～37℃融化

（2）超声破碎法

（3）自溶法

（4）酶处理法：胃蛋白酶或胰酶

（5）表面活性剂处理法：十二烷基硫酸钠

3.免疫球蛋白片段的制备五种免疫球蛋白都具抗性，皆可提取及纯化，但如分解成片段（如Fab

片段、Fc片段、轻链片段等）作为免疫可制备出分辨力更高的特异性抗血清。制备方法有：

（1）非共价键解离法：改变pH环境或用变性剂

（2）共价键解离法

（3）溴化氰裂解法

（4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶.木瓜酶可将IgG裂解成2个Fab片段及1个Fc片段；

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胃蛋白酶可将IgG裂解成F（ab′）2个片段及数个小片段；胰蛋白酶可将IgG切成不规则的肽链。

（二）可溶性抗的提纯和纯化

1.超速离心法：适用于少数大分子抗或比重较轻的抗，不适用于大多数中小分子抗。

2.选择性沉淀法：选择沉淀法是采用各种沉淀剂或某些条件使抗成分沉淀的方法。核酸去除法、盐

析法、有机溶剂沉淀法、聚合物沉淀法。其中盐析法是最常被采用，通过硫酸铵使蛋白抗进行初筛，提

取种球蛋白及进行抗浓缩。

3.凝胶过滤法：根据分子大小进行分离纯化。

4.离子交换层析法：根据所带电荷不同进行纯化分离。

5.亲和层析法：与生物分子间不同的亲和性进行分离。

6.电泳法：蛋白质在同一pH环境中，分子量和电荷不同，在电场中迁移速率不同进行分离。

（三）纯化抗的鉴定

1.蛋白质含量测定：常用的是紫外光吸收法，该法测定280nm和260nm的吸光度（A）值。

2.分子量测定采用聚烯酰胺凝胶电泳（SDS）法、凝胶过滤法等。

3.纯度鉴定采用醋酸纤维膜电泳、SDS、毛细管电泳、等电聚焦、高效液相层析法等。

4.免疫活性鉴定采用双向免疫扩散法、免疫电泳法或ELISA法等。

三、半抗性免疫的制备

半抗指只具有抗性而无免疫性的物质。多见于分子量小于4000的有机物质。半抗与载体相结

合具有免疫性。

（一）载体

1.蛋白质：以牛血白蛋白最常见

2.多肽聚合物：常用多聚赖氨酸

3.大分子聚合物和某些颗粒聚乙烯吡咯烷酮、药用炭、羧甲基纤维素等皆常用。

（二）半抗与载体的连接方法

1.物理方法：通过电荷和微孔吸附半抗。

2.化学方法：通过功能基团将半抗与载体连接。