氨基酸蛋白质提取工艺特性.ppt

⑤米隆反应：蛋白质与Millon试剂（亚硝酸汞、硝酸汞、亚硝酸及硝酸混合液）加热显红色或黄色沉淀，此沉淀能溶于硝酸呈红色，表明蛋白质分子中有酪氨酸的组成部分。⑥Folin-Ciocalteu试剂反应：试剂为1m10.5%CuSO4·H2O加1%酒石酸钠，再加50ml2%Na2CO3的0.1mo1NaOH溶液。蛋白质溶液加上述试剂室温下显红色。（这是肽键的反应，游离的甘氨酸对反应有干扰，无机盐则无影响）。⑦Sakaguchi反应：在蛋白质的水溶液中加a-萘酚的稀NaOH溶液，混匀后加数滴次氯酸钠，若出现红色，并有荧光，说明蛋白质分子中含有精氨酸（Arginine)。第31页,共32页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第32页,共32页，2024年2月25日，星期天关于氨基酸蛋白质提取工艺特性一、氨基酸的特性因氨基酸分子较小，且有羧基、氨基，同时具有碱性和酸性极性基团较多，所以它的极性较大，能溶于水，不溶于有机溶剂。因同时具有羧基和氨基，有酸碱两性的性质，能与酸和碱形成不同的盐。当溶液的pH发生变化时，溶液中的离子状态也发生了变化。在电场中酸性溶液的氨基酸则向阴极电泳，而在碱性溶液中则向阳极电泳，当溶液的pH值达一定时，氨基酸不向任何电极移动，此时溶液的pH值就是该氨基酸的等电点。不同的氨基酸有不同的等电点，在等电点时氨基酸的溶解度最低，根据这种性质可以用电泳法分离氨基酸。第2页,共32页，2024年2月25日，星期天氨基酸在适当的条件下，能进行有机胺或有机酸的几乎全部反应。与一般的酸和碱可生成稳定的盐，大部分均能溶于水，但与重金属如铜、银、汞等制成的络合物不溶于水，也可利用这种性质来分离氨基酸。第3页,共32页，2024年2月25日，星期天二、氨基酸的浸出①水浸出法：将中草药以粉碎机粉碎，装入逆流浸出罐组的每一个浸出罐中。用水做浸出溶剂，最好在有搅拌的条件下，加热进行逆流浸出。②稀乙醇浸出法：将生药粉末装入逆流渗滤浸出罐组的每一个浸出罐中。以70%乙醇进行渗滤浸出，先浸出的溶液浓度较大，后浸出的溶液浓度较低。最好采用逆流渗漉浸出法，把出液系数控制在5，可以得到较好的浸出效果。第4页,共32页，2024年2月25日，星期天三、氨基酸的分离水浸出液或稀乙醇减压浓缩后的水溶液往往含有几种或十几种氨基酸，因此所得的是总氨基酸，必须进行分离纯化。一般采用以下的纯化方法：①离子交换法:这是分离氨基酸的常用方法。可直接将水或稀乙醇提取物通过装有离子交换树脂的交换柱，带正荷的氨基酸与树脂上的-SO３基吸附。由于氨基酸带的正电荷随溶液pH发生变化，同一氨基酸在不同pH的缓冲溶液中，以及不同氨基酸在同一pH的环境中，所带的正电荷各不相同，与磺酸基吸附的强弱也相应不同。可以借助这种差别，使氨基酸互相分离。第5页,共32页，2024年2月25日，星期天②成盐分离法:利用某些酸性氨基酸与某些金属化合物，如氢氧化钡、氢氧化钙生成难溶性盐，或某碱性氨基酸与一般酸生成盐，从而与其他未成盐的氨基酸分离。如南瓜子中的南瓜子氨基酸是通过与过氯酸生成结晶性盐而分出的。③晶析法:利用不同氨基酸等电点不同，进行晶析结晶分离。例如在含有亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸的溶液，其pH值为1.5～2.0时，浓缩先晶析出亮氨酸，它的母液加盐酸后再浓缩晶析出异亮氨酸，最后母液中回收缬氨酸。第6页,共32页，2024年2月25日，星期天四、氨基酸、肽的鉴别反应①茚三酮(Ninhydrin)反应：所有的a-氨基酸及含有a-氨基酸的肽类和蛋白质都能和该试剂反应呈现兰色或兰紫色。必要时加热，反应可在滤纸上进行。(2)吲哚醌(Isatin）试剂反应：不同的氨基酸与吲哚醌试剂反应，能显示不同的颜色。由于试剂的配制方法不同，对同一种氨基酸所显示的颜色也往往有差异。吲哚醌不仅可用于氨基酸的显色，而且从其颜色的区别，可以帮助辨认氨基酸。显色不稳是其特点，氨对显色无干扰。第7页,共32页，2024年2月25日，星期天第二节蛋白质提取工艺特性一、不同结构的蛋白质及其溶解性质蛋白质按其功能可分为活性蛋白和非活性蛋白二类；按结构又可分为简单蛋白和结合蛋白二类：再一种分类是根据蛋白质的溶解度差别而分为水溶性蛋白、醇溶性蛋白等，还有一类硬蛋白，不溶于水、稀酸、稀碱和有机溶剂，遇强酸、强碱水解。第8页,共32页，2024年2月25日，星期天蛋白质类别溶解性质简单蛋白质1.白蛋白2.球蛋白a.真球蛋白b.拟球蛋白3.醇溶蛋白4.谷蛋白5.精蛋白6.组蛋白1、溶于水及稀盐、稀酸、稀碱溶液，可被50%饱和度硫酸铵析出。2、a.一般在等电点不溶于水，但加入少量的盐、碱则可