实验专项方案的格式.doc

试验方案

一.【试验题目】：

土壤中细菌分离纯化试验

二.【试验设计思想】：

细菌是含有很高实用价值一类微生物,世界各国对其研究和资源开发极为重视.现在,中国相关细菌区系调查及资源开发即使有部分报道,但对不一样作物根际细菌研究极少.甘肃天水麦积山海拔1742m,属黄土高原潮湿区,植物生长土壤区有机质含量丰富,此次试验将以该地域落叶松、马尾松、白岩松、野豌豆等作物生长地域土壤为材料,分离判定其中细菌,探讨不一样作物根际土壤中细菌分布数量及种类差异,而且分析每一个菌种在植物生长过程中所起作用，最终以此为依据来推断麦积山大片地域内土壤中微生物分布丰富情况和它们对植物生长作出巨大贡献.

三.【试验目标】：

1.学会培养基最基础制备方法。

2.学会最基础微生物灭菌、接种等基础操作过程。

2.掌握最基础分离、纯化微生物一系列操作操作。

四.【试验方法】：

取天水麦积山不一样植物根部土壤作为土样，经过对其土壤中微生物一系列培养、分离、筛选最终分离出细菌得菌株，并稀释平板菌落计数法进行数量测定

四．试验原理:

1.菌种起源：因为多种细菌对营养物质需求不一样，在不一样地方采样对选择所要细菌含量和其它杂菌含量多少直接相关，所以选择微生物含量有可能丰富土壤（天水麦积山植物根区）中采样。

2.培养基选择：为了使所要细菌能很好生长，其它微生物生长受到一定抑制，要用选择培养基。还要把细菌和其它微生物相区分，还要用判别培养基。为了达成既是选择培养基又是判别培养基，选择牛肉膏蛋白胨培养基。

3.培养及分离纯化：经过涂布培养法、平板划线法等方法达成分离纯化目标。

4.保藏：经过分离纯化得到菌种，接种和斜面培养基上，到一定时间后进行传代培养保藏，使其不死亡、降低突变所引发生物学性状改变。

5.经过形态和染色判定：因为多种微生物有其特定菌落形态特征和单细胞形态特征，可经过这些形态进行判定。还因为细胞壁组成不一样可进行判别染色法进行判定，也可用产生不产生芽孢进行芽孢染色。经过以上方法可对所分离纯化菌种进行初步判定。

6.经过生理生化反应进行判定：多种微生物在代谢类型上表现了很大差异，如表现在对对大分子糖类和蛋白质分解能力，和分解代谢最终产物不一样，反应出她们有不一样酶系。我们在试验室许可条件下做了糖类发酵和氧化、是否能产生过氧化氢酶和是否含有细胞色素氧化酶等生理生化试验，进行再次判定。

五【.试验材料】：

1.器材：玻璃烧杯、天平、搪瓷烧杯、三角瓶、量筒、漏斗、试管、培养皿、吸管、培养基分装器、电炉、接种环、移液枪、PH试纸（PH5.4—9）、牛角匙、牛皮纸、棉花、纱绳、高压蒸汽灭菌锅等。

2.牛肉膏、蛋白胨、NaCl、1mol/LNaCl、1mol/LHCl。

六．试验步骤：

1.配置牛肉膏蛋白胨培养基：

(1).配方及其配量：

牛肉膏

0.3g，

蛋白胨

1g

NaCl

0.5g,

琼脂粉

1.5g

水

100ml

注：PH7.2—7.4，每份如此，依据需要可改变量进行配置。

（2）.称取药品:按培养及配方和配量分别称取药品，取少于总量水于烧杯中，将各个培养及成份（琼脂除外）逐一加入水中待溶。

（3）．加热溶解：将玻璃被放在石棉网上（搪瓷烧杯可直接用文火加热），用文火加热并不停搅拌，促进各药品快速溶解，然后补充水分之所需培养基量。

（4）调整PH值：初配好牛肉膏蛋白胨培养液是微酸性，故需用1mol/LNaOH调PH至7.2-7.4。为避免调解时过碱，应缓慢加入NaOH液，即要边滴加NaOH边搅匀培养液，然后用PH试纸侧其酸碱度值。检测培养基pH，若pH偏酸，可滴加1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达成所需pH范围。若偏碱，则用

1mol/LHCl进行调整。pH调整通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子浓度.

（5）.过滤:液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果观察。不过供通常使用培养基．此步可省略

(6)分装:披试验要求，可将配制培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染。

分装量：固体培养基约为试管高度1／5，灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超出其容积内二分之一为宜。半固体培养基以试管高度1/4为宜．灭菌后垂直待凝。

(7).加棉塞试管口和三角瓶口塞上用一般棉花(非脱脂棉)制作棉塞，棉塞形状、大小和松紧度要适宜，四面紧贴管壁，不留缝隙，才能起到预防杂菌侵入和有利透气

作用。要使棉塞总长约3／5塞人试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生物需要愈加好透气，则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料盖替换棉塞。

(8)包扎:加塞后，将三角瓶棉塞外包一层牛皮纸