植物细胞程序性死亡PCD的诱导形态观察.pdf

首都师范大学生物实验报告

科目：细胞生物学班级：师范班姓名：王攀学号：1110800065

实验名称：植物细胞程序性死亡()的诱导、形态观察日期：

PCD

一、实验目的：

1、了解植物细胞PCD的概念

2、掌握植物细胞PCD的诱导方法、和统计方法

3、了解动物细胞凋亡过程的方法

实验原理：

1、细胞死亡：细胞死亡作为生物体的一种常见现象，在动物细胞中有三种方式：凋

亡

(apoptosis)，自噬(autophagy)和坏死(necrosis)。前两种类型属于细胞程序性

死亡(programmedcelldeath，PCD)。细胞坏死是细胞在遭受极度刺激时引起的细

胞死亡，以细胞质膜的破裂为特征，造成内含物的炎性泄露，是一种非正常死亡。细

胞的PCD是细胞的一种“主动性”死亡行为，从形态上和功能上都与细胞坏死有很

大的不同。

2、植物中细胞程序性死亡(PCD)：目前可依据液泡膜破裂后，是否在细胞质中发生快

速降解将PCD分为两个大类。第一类为自溶性(autolytic)PCD，与液泡中的水解

酶的释放有关，在液泡破裂后，导致细胞质的快速清除。第二种为非自溶PCD，

(non-autolytic)，即液泡膜破裂但是没有出现快速的细胞质的清除。目前鉴定细胞

的PCD类型，还是以细胞形态学为主。

3、动植物细胞凋亡标准：动物：凋亡：凋亡小体，或者在细胞表面的水泡，感染

病原体后在其他细胞中的降解。自噬：自噬小体，自溶酶体，和小的促进细胞溶解

的液泡数目的增加坏死：没有上面的定义的标准。植物：自溶：植物膜破裂之后对

细胞质的快速清理。非自溶：没有对细胞质的快速清理。其他：染色质浓缩细胞

核破裂自我标记信号自食信号细胞膨胀，细胞器膨胀，质膜破裂染色质浓缩。液

泡体积增加(细胞质体积减小)需要Ca2+的内流，细胞质皱缩，细胞器膨胀，小泡增

多但体积不增加。

三、实验步骤

1、植物细胞凋亡：加入较高浓度的CaCL2诱导，观察和统计诱发产生的PCD细胞。

用改良苯酚品红染色观察PCD细胞核发生染色质凝集(condensation)、趋边化

(margination)、产生PCD小泡等形态学上的变化。

(1)形态观察：洋葱内表皮，100mmol/LCaCl2500mmol/LCaCl2(注意都用PBS(6.5)

配置)处理两小时，用于形态观察和凋亡统计。

(2)PCD计数

2、动物细胞凋亡观察：观看录像。

四、实验材料

洋葱鳞茎内表皮、细胞PCD诱导剂——Ca2+、形态学观察染改良苯酚品红

色液

五、实验结果

1、植物细胞凋亡观察：

1）观察数据：

处理计数PCD率（平均）

47/11646/115如108/2630/12023/9331%

0.1M（

如图图B）如图如图如图

（（A）（C）（D）（E）

CaCl22

hr）

PCD率41%40%24%25%25%

数23/63如39/86如30/73如23/67如37/8939.6%

0.5M（（（（

据CaCl2图F）图G）图H）图I）（如图J）

（