猪脐静脉血管内皮细胞的分离及体外培养研究.pdf

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第34卷第5期中国预防兽医学报V01.34,No.5

2012年5月ChineseJournalofPreventiveMedicine

VeterinaryMay.2012

doi:10.3969/j.issn.1008—0589.2012.05.08

猪脐静脉血管内皮细胞的分离及体外培养研究

余乐L2,张思春2,李素2,杨凡力1.2,涂长春妒

(1.吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062;2.军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122)

摘要:为建立一种操作简单并且能获得大量猪血管内皮细胞的分离培养方法,本研究采集新生健康长白猪

脐带,取其脐静脉血管,灌注O.1%的I型胶原酶,于37℃水浴消化10rain后收集内皮细胞,培养于舍20%胎

牛血清的M199培养基中,长满单层后_拜3坡酶消化传代培养。并对培养的细胞形态学、相关抗原和其他特征以及

对病毒的易感性进行鉴定。结果表明,J型肢原醇消化后可获得大量内皮细胞,细胞培养后的形态学观察显示细

胞贴壁生长良好,呈典型的铺路石状排列;第Ⅷ因子相关抗原和细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白均呈阳性.内皮细

胞比率可高这100%。傍3代后的生长曲线显示细胞传代后延迟期小于1d,对数生长期约3d,第5d进入平台

期,第7d开始脱落死亡。病毒感染试验表明所获得的内皮细胞对猪瘟病毒高度易感,病毒生长与常用的PK-15

没有区别。上述研究结果表明本研究建立的血管内皮细胞分离培养方法简便有效,为大量制备原代血管内皮细胞

提供了可靠的方法。

关键词:猪瘟病毒;脐静脉血管内皮细胞;培养

中图分类号:S$52.16文献标识码:A

IsolationandcultureofswineumbilicaIveinendothelialcells

YU

Lelt一,Z/-IANGSi-ehunz,L1Su:,YANGFan—lil一,TU

Chang-chtmp

ofAnimalScienceaad

VeterinaryMedicme,lilin130062,China;

(1.CollegeUnivcrs埘,Changchun

2.InstitumMedical

ofV谢naIySciences,AeadmnyofMilitaryScien∞,Changehma130122,China)

Abstract:Toestablishamethodtoisolateandcultivateswineumbilicalveinendothelialvessels

simplecell(8UVEC),vein

Wel'efromumbilicalcordsofnewbornandinfmedwithIat

piglets37℃for10

separated0.1%collagenasesolutien.incubating

rain.EndothelialfluslledoutandculturedinM199mediumwith

20%FBS.TheconfluenceECs

cells(ECs)

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