生物化学核酸.ppt

DNA变性（加热或极端pH）第85页,共91页，2024年2月25日，星期天当DNA的稀盐溶液加热到80-100℃时，双螺旋结构即发生解体，两条链彼此分开，形成无规线团。DNA变性后，它的一系列性质也随之发生变化，如紫外吸收(260nm)值升高,粘度降低等。第86页,共91页，2024年2月25日，星期天4、核酸的复性变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。DNA复性后，一系列物理、化学性质将得到恢复。DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关。将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。但是将变性的DNA缓慢冷却时，可以复性，这一过程也叫退火（annealing)。分子量越大复性越难。浓度越大，复性越容易。此外，DNA的复性也与它本身的组成和结构有关。复性反应的速度用Cot1/2表示。Co为变性DNA复性时的浓度，t为时间，以秒表示。第87页,共91页，2024年2月25日，星期天DNA复性第88页,共91页，2024年2月25日，星期天5、核酸的杂交（hybridization）热变性的DNA单链，在复性时并不一定与同源DNA互补链形成双螺旋结构，它也可以与在某些区域有互补序列的异源DNA单链形成双螺旋结构。这样形成的新分子称为杂交DNA分子。DNA单链与互补的RNA链之间也可以发生杂交。核酸的杂交在分子生物学和遗传学的研究中具有重要意义。第89页,共91页，2024年2月25日，星期天核酸的杂交第90页,共91页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第91页,共91页，2024年2月25日，星期天4.比连环差比连环差以?表示。用它表示DNA的超螺旋程度。?=（L-L0）/L0L0表示松弛环形DNA的L值，如在上述超螺旋中，L=23，L0=25所以?=-0.08?可以视为DNA的超螺旋密度。天然DNA的超螺旋密度一般在-0.03到-0.09。负号表示超螺旋周为左手螺旋。第53页,共91页，2024年2月25日，星期天（一）RNA一级结构的特点RNA一级结构研究最多的是tRNA、rRNA以及一些小分子的RNA。组成RNA的核苷酸也是以3′-5′磷酸二酯键连接。其中1.tRNA一级结构具有以下特点：分子量25000左右，大约由70－90个核苷酸组成，沉降系数为4S左右。分子中含有较多的修饰成分。3′-末端都具有CpCpAOH的结构。5′端多为pG,也有pC。二、RNA的分子结构第54页,共91页，2024年2月25日，星期天tRNA概述约占总RNA的10-15%。它在蛋白质生物合成中起翻译氨基酸信息，并将相应的氨基酸转运到核糖核蛋白体的作用。已知每一个氨基酸至少有一个相应的tRNA。tRNA分子的大小很相似，链长一般在73-93个核苷酸之间。第55页,共91页，2024年2月25日，星期天2.mRNA约占总RNA的5%。不同细胞的mRNA的链长和分子量差异很大。它的功能是将DNA的遗传信息传递到蛋白质，指导蛋白质的合成。第56页,共91页，2024年2月25日，星期天mRNA一级结构的特点真核：单顺反子、5’-末端有“帽子”、3’-末端有polyA片段和非编码区和非编码区原核：多顺反子5’-末端无“帽子”、3’-末端无polyA片段（病毒除外）有非编码区有非编码区顺反子：mRNA上具有翻译功能的核苷酸顺序。polyA片段：指20-250个多聚腺苷酸。“帽子”结构：5’-末端的G被甲基化，通过焦磷酸与另一个发生了核糖上甲基化的核苷酸以5’、5’-磷酸二酯键相连。第57页,共91页，2024年2月25日，星期天极大多数真核细胞mRNA在3‘-末端有一段长约200核苷酸的polyA。polyA是在转录后经polyA聚合酶的作用而添加上去的。原核生物的mRNA一般无polyA，但某些病毒mBNA也有3’-polyA,polyA可能有多方面功能,与mRNA从细胞核到细胞质的转移有关；与mRNA的半寿期有关，新合成的RNA其polyA链较长，而衰老的mRNA，polyA链缩短。第58页,共91页，2024年2月25日，星期天mRNA5’-末端的“帽子”结构