牛乳中氯霉素的检测.ppt

关于牛乳中氯霉素的检测氯霉素（CAP）氯霉素是一种广谱抗生素，它能够对人类造成致命的血液疾病。如抑制人体骨髓造血功能而引起再生障碍性贫血症和粒状白细胞缺乏症等疾病。因此当没有其他替代品可用的时候，才会被应用作为治疗严重感染。第2页,共18页，2024年2月25日，星期天氯霉素（CAP）通常情况下，氯霉素仅仅作为外用制剂使用，比如氯霉素滴眼液。第3页,共18页，2024年2月25日，星期天氯霉素曾经作为兽药使用氯霉素在动物中的应用是很有吸引力的，因为动物对它有良好的耐受性，而且氯霉素在组织和体液中有良好的分布，半衰期长，而且价格便宜。第4页,共18页，2024年2月25日，星期天禁令

美国规定在动物性食品中不得检出氯霉素。

欧盟已明文规定氯霉素不再作为兽药使用。

香港卫生署也提出输港生牛奶中不能有抗生素残留不含有抗生素残留的牛奶已成为国际市场原料奶收购标准。第5页,共18页，2024年2月25日，星期天国家标准2001年9月我国农业部发布了《无公害食品生鲜牛奶》行业标准，这个标准对生鲜牛乳的卫生指标明确不得检出抗生素。2002年起国家禁止将氯霉素用于所有食品动物。第6页,共18页，2024年2月25日，星期天牛奶中残留氯霉素的检测方法竞争酶联免疫法(ELISA)气相色谱&质谱联用(GS-MS)高效液相色谱&质谱联用(HPLC-MS)高效液相色谱&荧光检测法(HPLC-FL)其中，美国FDA推荐使用的确证方法是气-质联用(GS-MS)和液-质联用(HPLC-MS)第7页,共18页，2024年2月25日，星期天竞争酶联免疫法(ELISA)利用抗体抗原反应。微孔板包有氯霉素抗体，加入氯霉素标记物、标准和样品溶液。游离氯霉素与氯霉素酶标记物竞争氯霉素抗体。没有连接的酶标记物在洗涤步骤中被洗去。将酶基质（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中并孵育；结合的酶标记物将无色的发色剂转化成蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝变为黄，在450nm处测量，吸光度与样品的氯霉素浓度成反比。第8页,共18页，2024年2月25日，星期天ELISA检测CAP的特点优点：最低检测可达到0.02ug/kg左右，方法灵敏度较高,特异性强,试样预处理简单,分析时间短,也不需要复杂的仪器设备,使用方便。缺点：由于抗体的批次不同,测定结果可能出现微小差异。第9页,共18页，2024年2月25日，星期天液相色谱法（LC）根据检测器的不同，分为三种方法高效液相色谱-二极管阵列法(HPLC-PDA)高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLU)高效液相色谱-紫外法(HPLC-UV)第10页,共18页，2024年2月25日，星期天液相LC原理系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。第11页,共18页，2024年2月25日，星期天LC检测CAP的特点优点：CAP都有很强的紫外吸收,可以直接用HPLC/UVD测定,用C18柱,样品制备不需要衍生化过程,操作简单。缺点：UVD选择性较差,具有紫外吸收的杂质都会产生干扰,故此方法的检测限不够理想。措施：采用FIU检测器，其检测限可达0.1Ug/L。第12页,共18页，2024年2月25日，星期天气相GC原理气相色谱系统由惰性固体上涂着液体的固定相和不断通过管柱的气体的流动相组成。利用固定相对样品中各组分吸附或溶解能力不同，即各组分在固定相和流动相分配系数的差别，从而达到分离的目的。第13页,共18页，2024年2月25日，星期天GC检测CAP的特点采用样品提取后衍生化,再用氮吹干、定容的方法进行气相色谱检测。优点：高分离效能、高选择性、高灵敏度、快速、应用广。缺点：氯霉素分子中含有硝基、羟基,分子极性大,需繁琐的衍生化步骤。第14页,共18页，2024年2月25日，星期天气-质联用GC-MS和液-质联用LC-MSGC/MS法和LC/MS法集高效分离和结构鉴定于一体,成为复杂混合物中痕量组分定性和定量的有力工具。GC/MS技术能够非常准确地确证食品中残留的氯霉素,但样品处理过程中必须进行衍生化反应,使该方法的应用受到了限制。近年来LC/MS仪器的普及率逐年提高,LC/MS有逐渐取代GC/MS,成为确证氯霉素