分子检测技术在细胞学中的应用.pptx

分子病理检测技术在细胞学中的应用BY:技术部目录分子诊断技术简介分子诊断技术应用概述宫颈癌&hTERC基因FISH在膀胱癌中的应用胸腹水EGFR基因变异检测BRAF基因与乳头状甲状腺癌分子诊断技术简介荧光原位杂交（FISH）技术荧光定量PCR－DNA，RNADNA测序技术－DNA突变生物芯片技术其他：Southern、Western、SISH（双标，银染色）分子诊断技术简介FISH技术生命科学中的“钓鱼”技术原理：通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交目的：获得细胞内多条染色体或多种基因状态的信息分子诊断技术简介荧光定量PCR法定量PCR技术：利用荧光的信号变化适时检测PCR反应过程中每一循环扩增产物量的变化。最终对起始模板量的精确定量。分子诊断技术简介基因测序基因测序技术：DNA测序技术，是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生A，T，C，G四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得DNA序列。分子诊断技术简介基因测序分子诊断技术简介生物芯片技术生物芯片技术：通过缩微技术，根据分子间特异性地相互作用的原理，将生命科学领域中不连续的分析过程集成于硅芯片或玻璃芯片表面的微型生物化学分析系统，以实现对细胞、蛋白质、基因及其它生物组分的准确、快速、大信息量的检测。1.样本DNA的制备2.扩增目的基因分子诊断技术简介生物芯片技术→3.杂交显色4结果读取分子诊断技术应用宫颈癌&hTERC基因hTERC（人类染色体末端酶）基因定位在3q26.3，该基因的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生；宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中多伴有3号染色体长臂扩增，可能涉及TERC基因。hTERC基因扩增能准确区分宫颈细胞高度癌前病变与低度癌前发育异常；同时，hTERC基因扩增能预测52%－96%的癌前病变有恶变的可能；hTERC基因扩增的检测极有助于宫颈癌的筛查及早期诊断；FISH技术是检测hTERC基因扩增的标准方法。分子诊断技术应用TERC基因的扩增可导致肿瘤产生高危型HPV持续性感染致癌基因E6/E7编码的原癌蛋白表达人类染色体端粒酶基因(hTERC)扩增阻止细胞正常凋亡细胞非典型性发育异常细胞癌变结果分析TERC探针:GLP探针,标记红色荧光对照探针:3CSP探针,标记绿色正常细胞判断:单个间期细胞红色及绿色信号各2个异常细胞判断:红信号大于2为异常细胞,且绿色信号不少于2个的细胞。结果分析宫颈癌筛查FISH检测指南分子诊断技术应用FISH在膀胱癌中的检测膀胱镜检查及细胞形态学检测是诊断及监测膀胱癌重要手段；膀胱癌的发展与3号、7号及17号染色体的非整倍性密切相关；对尿液或膀胱冲洗液中细胞进行以上遗传学改变检测，可用于膀胱癌的早期诊断及病程监测。其灵敏度高于细胞形态学检测，特异性则与细胞形态学检测相当。获FDA批准的膀胱癌尿液检测方法尿核基质蛋白22（NMP22）膀胱肿瘤抗原（BTA）免疫细胞检查法(ImmunoCyt)纤维素和纤维蛋白原降解产物荧光原位杂交（FISH）具有诊断潜力的肿瘤标记物，如端粒酶、存活素(survivin)、透明质酸和透明质酸酶、黏液素-7、核基质蛋白(BLCA-4)、微卫星序列分析和单核苷酸多态性分析等,其临床实用价值还有待于进一步研究观察膀胱癌FISH与尿细胞学检查比较FISH检查灵敏度高于尿细胞学检查，而特异度接近尿细胞学检查。临床应用临床上顽固性不明血尿的筛查（移行上皮细胞肿瘤早期诊断）。移行上皮细胞肿瘤治后病程监测膀胱癌的病人，治疗后进行检测。FISH早于膀胱镜检查。肾癌/肾盂癌鉴别诊断肾癌可以穿破肾盂，肾盂癌可以浸入肾实质内，当影像学或CT检查不能明确区分肿瘤来源时，FISH检测既可辅助医生对肾癌、肾盂癌进行鉴别诊断。膀胱癌探针检测试剂盒分子诊断技术应用EGFR基因变异检测及临床应用EGFR又称HER-1，位于人类Chr7的短臂针对EGFR基因的分子靶点药物EGFRInhibitors（检测EGFR突变）Gefitinib（Iressa－易瑞莎）Erlotinib（Tarceva－特罗凯）分子诊断技术应用EGFR基因变异检测及临床应用非小细胞肺癌中EGFR酪氨酸激酶区不同组织突变捡出率：–47.2%(肺切除标本石蜡组织)–42.9%(新鲜手术切除或活检标本)–38.1%(支纤镜活检样品)–30.8%(支纤镜细胞刷片样品)–42.9%(转移灶活检样品)–30.8%(胸水或腹水样品）Fukuharaetal,2006AACRAbstract4547不同标本EGFR基因突