海藻糖对施氏鲟精子冷冻保存效果的影响及其冷冻损伤机理的初步探究.docxVIP

文章编号：1004-2490(2023)01-0001-13

海藻糖对施氏鲟精子冷冻保存效果的影响及其冷冻损伤机理的初步探究

陈张帆2,3,程鹏2,胡谋4,王洁2,5,

张婷婷2,5,黄红涛1,杜合军1,陈松林2,3

(1.三峡工程鱼类资源保护湖北省重点实验室，中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所，湖北宜昌443100;

2.中国水产科学研究院黄海水产研究所，崂山实验室，海洋渔业科学与食物产物过程功能实验室，

山东青岛266071;3.山东省海洋渔业生物技术与遗传育种重点实验室，山东青岛266071;

4.杭州千岛湖鲟龙科技股份有限公司，杭州311701;5.上海海洋大学水产与生命学院，上海201306)

摘要：为了解抗冻剂对施氏鲟(Acipenserschrenckii)精子冷冻保存效果的影响及其冷冻损伤机理，比较了添加不同浓度海藻糖和蔗糖作为冷冻保护剂的精子稀释液处理后施氏鲟精子冷冻复苏的活力、快速运动时间和寿命。结果表明，添加60mmol·L-1海藻糖1.0mmol·L-1氯化钾的稀释液处理后，精子冻后快速运动时间和寿命与鲜精相比无显著差异(P0.05);且活力较其他处理组有所提高，达到(26.67±3.32)%,但仍显著低于鲜精(P0.05)。利用透射电镜和扫描电镜对施氏鲟精子超低温冷冻保存前后的超微结构进行观察，并对其能量代谢酶和抗氧化酶活进行测定和比较，结果表明，低温冻存造成施氏鲟精子的膜系统和细胞器（主要为线粒体和轴丝）损伤；能量代谢酶［总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶 (LDH)]和抗氧化酶［过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)]活性均显著下降(P0.05),而抗氧化酶谷胱甘肽还原酶(GR)活性显著上升(P0.05),表明冷冻精子的生理功能损伤、内环境稳定性下降，能量供给系统被破坏。未添加抗冻剂组精子的总ATP酶、CK、CAT、SOD及GR酶活性相比添加抗冻剂组有显著差异，说明含有海藻糖的抗冻剂可对冷冻精子起到一定的保护作用。研究结果可为后期进一步优化施氏鲟抗冻剂的配方提供理论基础与研究思路。

关键词：施氏鲟；精子；超低温冷冻；海藻糖；冷冻损伤

中图分类号：S961文献标志码：A

鱼类种质资源是物种保护、良种培育及水产养殖业可持续发展的重要物质基础[1]。超低温冷冻保存技术的发展可实现具有科学研究价值的水生生物配子的长期保存[2],对遗传育种、生物多样性保护、渔业可持续发展均具有重要意义。但由于不同种类鱼精子的生理学和生物学特性存在差异，因此研究者针对不同种类的鱼类精子冷冻保存步骤、抗冻稀释液组分构成、降温

方式、复苏温度和步骤、激活溶液等方面已开展了一定研究[3-6]。近年来，为了进一步优化鱼类精子冷冻效果，提高其活力、寿命及受精率，科研人员对不同种类的鱼类精子开展了冷冻损伤机理的研究，例如精子结构损伤[7-8]、酶活性测定[9-10]、转录水平和蛋白水平的差异变化[11-12]等。

施氏鲟(Acipenserschrenckii)隶属硬骨鱼纲

收稿日期：2022-09-06

基金项目：三峡工程鱼类资源保护湖北省重点实验室主任基金开放课题(2020048-ZHX);山东省重点研发计划(2021LZGC028);中央级公益性科研院所基本科研业务费(No.2020TD20);泰山学者攀登计划

作者简介：陈张帆(1985—),女，福建霞浦人，副研究员，主要从事鱼类重要性状基因功能研究。E-mail:chenzf@ysfri.ac.cn

通信作者：陈松林，中国工程院院士，E-mail:chensl@ysfri.ac.cn;杜合军，研究员，E-mail:duhejun21@126.com

2海洋渔业2023年

(Osteichthyes)鲟