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第五章

分子生物学研究法(II)

本章主要内容

一、基本概念

二、基因文库

三、基因敲除技术

四、基因克隆技术

五、荧光定量PCR

一、相关概念

◼持家基因：是指对所有类型组织细胞在任何时候都

需要其表达的基因，通常都是维持细胞基本生存所

必需的基因，其表达常保持在固定的水平。又称为

组成性基因表达。

◼奢侈基因：只在某特定的细胞类型中表达或者只有

在发育阶段的某些时期表达的基因。

◼报告基因：一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，

也就是说，是一个表达产物非常容易被鉴别的基因。

◼自杀基因：是指将某些病毒或细菌的基因

导入靶细胞中，其表达的酶可催化无毒的

药物前体转变为细胞毒物质，从而导致携

带该基因的受体细胞被杀死，此类基因称

为自杀基因。

分子克隆：在体外对DNA分子按照即定目的

和方案进行人工重组，将重组分子导入合适

宿主，使其在宿主中扩增和繁殖，以获得该

DNA分子的大量拷贝。

融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表

达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成

的蛋白质。

基因诊断：以DNA或RNA为诊断材料，通过检查基因

的存在、结构缺陷或表达异常，对人体的状态和疾病

作出诊断的方法和过程。

基因治疗：一般是指将限定的遗传物质转入患者特定

的靶细胞，以最终达到预防或改变特殊疾病状态为目

的治疗方法。

二、基因文库

1基因文库(genelibrary)概念

◼又称DNA文库，是指某个生物的基因组DNA

或cDNA片段与适当的载体在体外重组后，

转化宿主细胞，并通过一定的选择机制筛

选后得到大量的阳性菌落(或噬菌体)，所

有菌落或噬菌体的集合即为该生物的基因

文库。

◼基因文库由外源DNA片段、载体和宿主组成。

基因文库的分类

按照外源DNA片段的来源：

◆从特定组织提取的染色体基因组DNA

基因组DNA文库（总）

◆mRNA反转录成的cDNA拷贝

cDNA文库（部分）

基因文库的目的

为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得

所需的目的基因。

基因组文库

部分基因文库

PCR

基因组DNA文库

基因组DNA

限制性内切酶

1)基因组文库(Genomiclibrary)

是指将某种生物体的全部基因组

基因重组DNA用限制性内切酶或机械力量切

割成一定长度范围的DNA片段，再

与合适的载体在体外重组并转化相

体外包装应的宿主细胞获得的所有阳性菌落，

这个群体就称为该生物基因组文库。

其目的是分离有用的目的基因和

转化细菌保存某种生物的全部基因。

2)cDNA文库(cDNAlibrary)：

◼是指将某种生物体基因组转录的全部mRNA

经反转录产生的cDNA片段分别与克隆载体

重组，储存于某种受体菌中，该群体就称

该生物基因组的cDNA文库。

◼cDNA(complementaryDNA，互补DNA)：是

由生物的某一特定器官或特定发育时期细

胞内的mRNA经体外反转录后形成的互补DNA。

cDNA文库的构建：

mRNA

反转录