大黄鱼(Larimichthyscrocea)Tristetraprolin基因的克隆与功能分析_NormalPdf.docxVIP

第54卷第6期海洋与湖沼Vol.54,No.6

2023年11月OCEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICANov.,2023

大黄鱼(Larimichthyscrocea)Tristetraprolin基因的克隆与功能分析*

汪慧娟1何志巧1石戈1周素明2张晓林1申望1①

(1.浙江海洋大学海洋科学与技术学院浙江舟山316022;2.宁波大学海洋学院浙江宁波315211)

摘要Tristetraprolin(TTP)是广泛存在于真核生物的RNA结合蛋白。TTP通过促进mRNA降解或抑制翻译在转录后水平抑制炎症因子表达,是炎症性疾病的潜在治疗靶点。采用RACE技术获取了大黄鱼(Larimichthyscrocea)TTP(命名为LcTTP)cDNA的全长序列。LcTTP全长cDNA1508bp,包括77bp的5′-非编码区(5′-UTR)、183bp的3′-UTR和1248bp的开放阅读框(ORF),编码418个氨基酸残基。推导的LcTTP理论分子量44897.78Da,预测等电点pI8.37;哺乳动物TTP的重要功能结构域:N-端核输出序列(NES)、中央串联锌指结构域(TZF)、C-端NOT1-结合结构域(NOT1-BD)也在LcTTP中保守存在;系统发育分析显示LcTTP和其他脊椎动物TTP聚为一支,并与哺乳动物ZFP36家族其他成员ZFP36L1、ZFP36L2和ZFP36L3的进化支分离。组织表达特异性分析显示检测的9个组织均表达LcTTPmRNA,但不同组织间表达水平差异大,其中肌肉组织表达水平最高。大黄鱼头肾细胞系LYC-hK细胞中过表达LcTTP上调LPS诱导早期(1h)TNF-αmRNA表达量,之后TNF-αmRNA表达量快速下调至接近对照组水平(1.5h);放线菌D抑制转录后过表达LcTTP上调TNF-αmRNA降解速率,表明LcTTP可通过促进TNF-αmRNA降解调节TNF-α表达。以上研究结果提示LcTTP可能是大黄鱼炎症反应平衡关键调控蛋白,在大黄鱼感染性病害防治策略开发中有潜在应用价值。

关键词大黄鱼;RNA结合蛋白;Tristetraprolin蛋白;炎症反应;转录后调控

中图分类号Q789;S965doi:10.11693/hyhz20230500103

炎症反应是病原感染、组织损伤等胁迫作用诱导的机体适应性反应。受控的适度炎症反应清除入侵病原或修复组织损伤,而失控的高炎症反应则导致组织器官损伤,诱发炎症性疾病甚至死亡(Medzhitov,2008)。因此,炎症因子表达在转录水平和转录后水平都受到严格调控(Yoshinagaetal,2019)。RNA结合蛋白(RNAbindingprotein,RBP)介导的在转录后水平调节炎症因子mRNA加工、定位、降解和翻译,是炎症因子表达调控的关键机制(Kafaslaetal,2014;Uchidaetal,2019)。

Tristetraprolin(TTP,别名ZFP36、TIS11、GOS24、NUP475)是ZFP36家族RBP的原型蛋白,广泛存在于

真核生物中(Makitaetal,2021)。哺乳动物TTP都有3个保守功能结构域:N-端的核输出信号(nuclearexportsignal,NES)、中央串联的2个CCCH型锌指结构域(tandemzinc-fingerdomain,TZF)和C-端的NOT1-结合结构域(NOT1-bindingdomain,NOT1-BD)(Akiraetal,2021)。TZF结构域识别、结合靶mRNA3′-非翻译区(