抗植物病虫害基.ppt

把ＴＭＶ的ＲＮA编码126kD蛋白的通读部分(readthrough)的54kD（包含病毒复制酶核心功能团）的基因导入烟草，转基因烟草对TMV表现出很高的抗性(接毒500μg/ml,植株不发病)。很可能是不完整的复制酶亚基基因赋予了植物细胞这种抗性。第95页,共116页，2024年2月25日，星期天2.病毒复制酶基因特点病毒复制酶基因所介导的抗性强。远远强于ＣＰ基因介导的抗性。即使对转基因植株使用高浓度的病毒或其RNA，仍具有明显抗性。第96页,共116页，2024年2月25日，星期天3.病毒复制酶基因的应用用豌豆早褐病毒（PEBV）221kD的复制酶中相当于TMV的54kD部分的核酸片段转化烟草，获得的转基因植株对高达1000μg/ml的接种量仍具有高度抗性。第97页,共116页，2024年2月25日，星期天将编码CMV复制酶的二个亚基的缺失的cDNA转入烟草，工程植株可抗500μg/ml的病毒或100μg/mlRNA的接种量。第98页,共116页，2024年2月25日，星期天三、卫星RNA抗病毒原理应用存在问题第99页,共116页，2024年2月25日，星期天卫星RNA：卫星RNA是多核苷酸，它们有时在其相伴病毒中被发现。它们按照相伴病毒的复制和传播机制，从一个植株传到别一个植株。它们不与其相伴病毒的核苷酸序列同源，对病毒的复制也不起作用。但是卫星RNA具有改变其相伴病毒的致病力的能力。第100页,共116页，2024年2月25日，星期天1.抗病毒原理相应病毒侵入植物细胞，其卫星RNA被激活和放大，对病毒产生抗性。抗性水平不因病毒的接种量而降低。植物细胞中只要有低浓度的卫星RNA的转录体即可产生抗性。第101页,共116页，2024年2月25日，星期天2.病毒卫星RNA的应用目前获得一些带有病毒卫星RNA的转基因植株。如，表达CMV和烟草环斑病毒（TRV）的卫星序列的转基因烟草植株。当被其相应的病毒侵染时，其发病症状减轻。第102页,共116页，2024年2月25日，星期天3.存在问题只有少数植物病毒含有卫星RNA，限制了应用范围。卫星RNA有可能被其自然的病毒载体包装并释放到环境中。一个核甘酸的突变可能会造成严重病状，或病毒卫星RNA和植物卫星RNA重组，从而产生一种难以预料的病症。有些卫星RNA能够增强病毒的致病力。第103页,共116页，2024年2月25日，星期天四、核糖体失活蛋白基因1.RIP分类2.RIP作用机理3.RIP基因的应用第104页,共116页，2024年2月25日，星期天是一类能抑制蛋白质生物合成的蛋白，广泛存在于高等植物中，含量丰富。核糖体失活蛋白：

（ribosome-inactivatingprotein，RIP）第105页,共116页，2024年2月25日，星期天１.RIP分类据结构可为2种类型：I型RIP：是单链碱性蛋白质。分子量约为30kD，带有或不带有糖基，但其生物活性都一样，都具有抑制无细胞蛋白质生物合成的作用,对完整细胞或动物呈无毒或低毒。II型RIP：是由A、B两条肽链通过二硫键组成的二聚体。分子量约为60kD。其A链与I型RIP同源呈酸性或碱性，是毒性分子，B链是凝集素，能结合到细胞膜表面并协助A链进入细胞。第106页,共116页，2024年2月25日，星期天２.RIP作用机理RIP选择性作用于60S核糖体大亚基，抑制肽链延伸。大多数植物和细菌中的RIP是通过它的N一糖苷酶（N-g1ycosidase）活性来抑制蛋白质合成的功能。它特异地作用于28ＳrRNA的第4324位核苷酸的腺瞟呤与核糖之间的N一糖苷键，进行水解，除掉腺瞟呤，使核糖体失活，不能合成蛋白质。第107页,共116页，2024年2月25日，星期天真菌中的RIP则通过其核酸酶（RNase）活性起作用，RIP专一水解真核细胞核糖体28ＳrRNA第4325和4326位核苷酸之间的磷酸二酯键。不同的RIP分别对于病毒、真菌和昆虫具有不同的抗性。能使植物获得广谱抗性。第108页,共116页，2024年2月25日，星期天商陆抗病毒蛋白

(pokeweedantiviralprotein，PAP)抗植物和动物的多种不同病毒。现已分别从商陆的春叶、夏叶和种子中分离出三种PAP，分子量分别为29kD、30Kd、31kD。均不含糖的单链RIP。PAP抑制病毒，使病毒不能制造自身的蛋白，同时也不能利用寄主细胞的蛋白。第109页,共116页，2024年2月25日，星期天３.RIP基因的应用M