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病原微生物分子诊断方法学对比
方法学
优势
劣势
单重分子生物学检测(包括PCR、恒温扩增等)
1、价格适中
2、操作简单、快速,可实现全自动化检测
3、可实现定量检测
4、可依据情况灵活检测目标微生物
5、敏感度与特异度均较高
1、需要预判潜在致病微生物,为目标性检测
2、仅扩增病原微生物基因组的部分片段,所选择的靶区域突变或病原载量较低时可导致假阴性
多重分子生物学检测
1、操作简单、快速,可实现全自动化检测
2、可同步检测多种微生物,可通过多种组合覆盖常见的病原微生物与重要耐药基因
3、敏感度与特异度均较高
1、病原微生物组合相对固定,难以涵盖少见的病原微生物
2、仅扩增病原微生物基因组的部分片段,所选择的靶区域突变或病原载量较低时可导致假阴性
3、成本较高
tNGS
1、与mNGS相比,检测时间缩短,敏感度与特异度更好,无需检测人源序列,检测成本下降
2、与多重分子生物学检测方法相比,覆盖病原微生物范围更广
3、针对16SrRNA的tNGS是肺部微生态分析的标准方法
1、病原谱比mNGS窄,无法检测未知病原微生物
2、设备和操作复杂,检测时间受检测步骤与方案的制约
mNGS
1、无需预判病原微生物,对检测目标无偏好性,理论上可检测数据库中所有病原微生物
2、可检出新发、未知、罕见病原微生物,可作为病原学诊断依据
1、检测结果临床解释有一定难度
2、容易受到人源核酸干扰
3、易受环境微生物、定植微生物、工程菌干扰
4、操作流程复杂
5、价格昂贵
中华结核和呼吸杂志2023年4月第46卷第4期ChinJTubercRespirDis,April2023,Vol.46,No.4
病原微生物分子诊断方法学特点
靶向病原高通量测序tNGS简介
tNGS采用超多重PCR建库体系,应用二代测序技术,针对不同症候群精选数百种致病病原及多种耐药基因/基因型,添加Bio-Caliper利用核心算法及模型,进行靶向高通量测序(tNGS)分析,实现病原广谱精准检测,满足临床98%以上的病原体检测需求。
超多重PCR(2000重)建库
超多重PCR(2000重)建库
+
高通量测序
=
靶向病原精准广谱检测
tNGS
一、产品优势:
广谱检测:数百种致病病原+多种耐药基因/基因型,满足临床98%病原检测需求。
精准分型:特殊测序算法,NGS直接读取分型SNP,实现精准分型。
D+R共检:1份样本,1提取,1次建库,共同检测DNA和RNA病原,无需分开送检。
高效超敏:①敏感性优于mNGS、②病原菌分型能力强于mNGS和PCR
快速检测:实验TAT12小时。
高性价比:千元左右,仅为mNGS价格的1/3-1/6,但可解决98%临床问题。
二、技术特点:
提取:物理研磨+生化酶解实现高效破壁,提升胞内菌、真菌检出率。
建库:
每种病原体针对多拷贝区域设计≥2对特异性引物序列,重要病原设计多对引物。
靶向富集,无宿主干扰、增加敏感性。
双index建库,降低交叉污染。
设置阴性对照、阳性对照、空白对照,全方位保障结果准确性性。
测序:
高通量二代测序,检测病原特异性核酸序列,利用SNP位点不同实现病原精准分型。
使用KMMiniSeqDx-CN(国械注准20203220340)测序仪,快速芯片进行快速检测(1*100bp,测序时间5h)。
生信:
实验添加无偏倚均一无干扰性Bio-Caliper,标准曲线和核心算法模型,结合上万例临床真实标本进行验证,将病原体均一化序列数转变为定量浓度。
基于数十万例临床样本建立的tNGS微生物数据库,利用核心算法保障结果稳定输出。
流感病毒相对溯源:利用不同患者同一流感病毒特异性核酸序列的差异,进行溯源。
病原微生物tNGS项目panel参考
项目名称
检测范围
临床场景
样本类型
建议收费(元)
TAT
上感50
上呼吸道95种病原体+肺炎支原体耐药位点
轻型、中型肺炎患儿
咽拭子
500-800
本地化检测第二天出报告
呼吸100
呼吸道153种病原体+370耐药位点
呼吸道感染住院患者
肺泡灌洗液、深部痰、咽拭子
1000-1200
神经100
100余种神经系统感染常见病原体+多种耐药基因
神经系统感染住院患者
脑脊液
1000-1200
MTB-NTM
结核分枝杆菌复合群及166种分枝杆菌
疑似结核、ntm感染
深部痰、肺泡灌洗液、胸腹水、脑脊液、新鲜组织、灭活培养物
1000
MTB
结核分枝杆菌复合群及结核一线、二线抗结核耐药基因/位点、覆盖12种药物13个基因200+个位点
结核耐药精准用药
1000
感染1000
400多种病原体+300多种耐药基因
肺脓胸、肺脓肿患者
全样本类型
(血液慎用)
1500-1800
MetaCAP
全面覆盖
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