总酚含量测定.docx

时间：二

时间：二O二一年七月二十九日

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时间：二O二一年七月二十九日

总酚含量测定参考韩富根的方法,略有改动,之勘阻及广创作

时间：二O二一年七月二十九日

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样品处置：取鲜叶0.5g,加3ml95%乙醇研磨成匀浆状,再加5ml95%乙醇过滤,用95%乙醇定容至25ml.以儿茶酚作标准曲线.

样品测定：取2ml待测液于10ml离心管中,再加入2ml福林试剂,摇匀,3min后加入10%碳酸钠2ml振荡.静置1h后700nm处比色测定,以2ml蒸馏水取代待测液作为空白.根据标准曲线计算总酚含量.【七种与小麦近缘的野生植物对禾谷缢管蚜抗性的生化机制】

①福林试剂：将钨酸钠25g、磷钼酸5g,磷酸12．5ml同蒸馏水188ml一道回流煮沸2h,冷却后用蒸馏水定容至1L.

②10%碳酸钠溶液：用无水碳酸钠配制,夏季气温低时会析出碳酸钠结晶,可在温水浴上加热溶解后使用.

总体积ml6

总体积ml

6

6

6

6

6

6

福林试剂ml

2

2

2

2

2

2

10%Na2CO3ml

2

2

2

2

2

2

邻苯二酚ml

0

蒸馏水ml

2

浓度ug/ml

0

10

20

30

40

50

单宁的测定参考范璐的方法,

①干样品去除杂质,将样品粉碎并全部通过1.0mm孔径的筛网.

②精确称取试样1g于100ml三角瓶中,加75%二甲基甲酰胺溶液50ml,加塞,室温振荡提取60min,双层滤纸过滤,滤液备用.

③准确吸取1.0ml提取液于试管中,准确加入6.0ml水、1.0ml8g/L

（35ml/L）氨溶液,摇匀,自加氨溶液后计时,10min后以525nm为测定波长,水作空白测定样液的吸光度值.

④准确吸取1.0ml提取液于试管中,准确加入5.0ml水、1.0ml(3.5g/L)柠檬酸铁铵溶液、1.0ml氨溶液,摇匀,自加氨溶液后计时,10min后,以525nm为测定波长,水作空白,测定样液的吸光度值.两次测得吸光度值之差为样品中单宁的吸光度值.

⑤配制单宁酸含量为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml标准系列,分别吸取标准溶液1.0ml,准确加入5.0m水、1.0ml柠檬酸铁铵溶液、1.0ml氨溶液,摇匀,自加氨溶液后计时,10min后以525nm为测定波长,水作空白测定标准溶液的吸光度值

可溶性卵白质的测定

样品处置：小麦分蘖早期,称取各供试品种剪碎叶片0．5g,加入2ml蒸馏水研磨后倒入10ml离心管中,再向残渣中加入6ml蒸馏水分两次冲刷,洗涤液转入离心管,放置半小时,摇匀悬浮后离心20分钟,取上清液,然后定容10ml容量瓶.

样品测定：测按时,取上清液O.1ml加蒸馏水0.9ml,加5ml考马斯亮蓝G一250卵白质试剂混匀,显色后在595nm波长下测定光密度.用牛血清卵白绘制标准曲线.卵白质含量测定公式：样品中卵白质含量(mg／g)=查得的卵白质含量(岭)×提取液总体积(m1)／样品鲜重(g)×测按时取用提取液体积(m1).

标曲的制备：0~1000μg／mL标准曲线的制作：另取6支

10mL具塞试管,按表取样.盖塞后,将各试管中溶液纵向倒转混合,放置2min后用1cm光经的比色杯在595nm波长下比色,记录各管测定的光密度OD595nm,做出卵白质浓度为0~1000μg／mL的标准曲线.表2高浓度标准曲线制作

管号

1

2

3

4

5

6

1000ug/ml

0

10.

标准卵白

液（ml）

蒸馏水

（ml）

1

考马斯亮蓝G-250试

剂（ml）

5

5

5

5

5

5

卵白质含

量（ug）

0

200

400

600

800

1000

OD595nm

OD595nm

试剂配制：（1）牛血清白卵白标准溶液的配制：准确称取100mg

牛血清白卵白,溶于100mL蒸馏水中,即为1000μg／mL的原液.

（2）卵白试剂考马斯亮蓝G-250的配制：称取100mg考马斯亮蓝G-250,溶于50mL90％乙醇中,加入85％（W／V）的磷酸100mL,最后用蒸馏水定容到1000mL.此溶液在常温下可放置一个月.

时间：二O二一年七月二十九日

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