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细菌源脂肪酶的发酵生产及其纯化和固定化工艺研究的中期报告

摘要：

本文第一部分介绍了细菌源脂肪酶的基本特性及其应用领域。第二部分介绍了脂肪酶的发酵生产过程，包括菌种选择、培养基配方、发酵条件等。第三部分介绍了脂肪酶的纯化过程，包括提取、分离、富集等。第四部分介绍了脂肪酶的固定化工艺，包括固定化材料的选择、活化方法等。

关键词：细菌源脂肪酶；发酵生产；纯化；固定化

1.引言

脂肪酶是一类催化脂肪酸水解的酶，在食品加工、生化工程、医药等领域得到了广泛的应用。目前主要来源于动物、微生物和植物等。其中微生物源脂肪酶具有操作简便、发酵生产效率高、产量大等优点，因此受到了越来越多的关注。本研究针对细菌源脂肪酶的发酵生产及其纯化和固定化工艺展开研究，旨在提高脂肪酶产量和酶活力，优化酶的纯化和固定化工艺，为其应用提供基础研究支持。

2.细菌源脂肪酶的基本特性及其应用领域

微生物源脂肪酶主要来自细菌、真菌和酵母等。细菌源脂肪酶具有多样化的基因型和表型，可根据其结构和环境要求分为真核细胞内源脂肪酶和细菌源脂肪酶两类。细菌源脂肪酶的特点是具有高的产酶能力和活性，有更广阔的应用范围，如食品加工、化妆品生产、生物柴油生产等。细菌源脂肪酶的应用已成为当前工业应用中的一个重要领域。

3.细菌源脂肪酶的发酵生产过程

3.1菌种选择

本研究选用Pseudomonasaeruginosa为菌种，该菌生长速度快、抗环境能力强、适应性广，适合大规模生产。

3.2培养基配方

本研究采用从盆栽土中提取的天然复合基质作为菌种的培养基，其中包括碳源、氮源、磷源等。配方如下：添加10g/L葡萄糖，5g/L酵母提取物，3g/L麦芽粉和0.5g/LKH2PO4，pH为7.0。

3.3发酵条件

采用摇瓶培养法，设定发酵条件如下：温度30℃，初始pH值7.0，培养时间72h，转速为180r/min。

4.细菌源脂肪酶的纯化过程

4.1提取

将发酵物经过离心分离，收集上清液，用4℃的冷醇（醚或异丙醇）进行沉淀，得到粗酶液。

4.2分离

采用puroliteC160的阳离子交换树脂分离脂肪酶。将粗酶液加入已膨胀后的puroliteC160树脂柱中，用适当的洗脱液进行洗脱，得到脂肪酶富集液。

4.3富集

将脂肪酶富集液进行干燥，得到脂肪酶粉末。

5.脂肪酶的固定化工艺

5.1固定化材料的选择

常用的固定化材料包括纤维素、明胶、各种氧化铝、玻璃纤维、硅胶等。本研究考虑到较为成本合理的因素，选用明胶为固定化材料。

5.2活化方法

采用孔径大小为0.5-0.8mm的明胶微球固定化脂肪酶。先将微球用酶活液滴洒，4℃放置16h，再经过水洗除去未活化的酶，使酶颗粒达到活性酶的比例。

6.结论

本研究就细菌源脂肪酶的发酵生产、纯化和固定化工艺展开研究，探索了提高脂肪酶产量和酶活力的途径，优化了酶的纯化和固定化工艺。经实验验证，所得到的脂肪酶在工业应用中有较好的应用前景。