2.5 导入宿主细胞.ppt

主讲老师：邢煜骞导入宿主细胞

如何将克隆载体导入到宿主细胞呢

宿主细胞能够供载体进入并支持其复制和蛋白质表达的细胞宿主细胞可分为以下两类：原核生物——大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌等真核生物——酵母菌、丝状真菌、哺乳动物细胞等

理想宿主细胞应满足的条件容易获得较高浓度的细胞能利用廉价易得的原料不致病、不产生肉毒素发热量低、需氧低，适当的发酵温度容易进行代谢调控容易进行DNA重组技术操作产物的产量、产率高，产物容易提取。

原核生物特点大部分原核生物细胞没有纤维素组成的坚硬细胞壁，便于外源DNA的进入没有核膜，染色体DNA没有固定结合的蛋白质，这为外源DNA与裸露的染色体DNA重组减少了麻烦基因组小，遗传背景简单，并且不含线粒体和质体基因组，便于对引入的外源基因进行遗传分析原核生物多数为单细胞生物，容易获得一致性的实验材料，并且培养简单,繁殖迅速，实验周期短，重复实验快

真核生物种类酵母：基因结构相对比较简单，便于基因工程操作；培养简单，适于大规模发酵生产，成本低廉；基因表达产物能分泌到培养基中,便于产物的提取加工;不含特异性的病毒，不产生毒素，是安全的受体细胞。植物细胞：具全能性。有水稻、棉花、玉米、马铃薯、烟草和拟南芥等。动物细胞：多采用生殖细胞、受精卵细胞或胚细胞以及干细胞。有猪、羊、牛、鱼、鼠、猴等。

导入宿主细胞的方法转化转染转导

外源DNA转化方法化合物诱导转化法热休克法电穿孔转化法微弹轰击(基因枪)转化法激光微束穿孔转化法超声波处理转化法脂质体介导转化法体内注射转化法花粉管通道转化法精子介导法低能离子束介导转化法根癌农杆菌介导转化法

小结转化、转导和转染主要是基于什么来分类的？宿主细胞分类条件特点导入方法分类具体方法

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