2-金黄色葡萄球菌检验.pptx

金黄色葡萄球菌检验培训中心《食品安全标准》食品质量与安全专业教学资源库TeachingResourceLibraryofFoodQualityandSafety上海城建职业学院曲瑞丹

金黄色葡萄球菌的检测程序

样品的稀释以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。液体样品：

增菌与分离培养将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养18h～24h或45h～48h。增菌培养：吸取5mL上述样品匀液，接种于50mL7.5%氯化钠肉汤或10%胰酪胨大豆肉汤培养基内，36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。

阳性和阴性对照金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验取肉汤培养物0.5mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于试管内充分混合,置36±1℃培养,定时观察是否有凝块形成,至少观察6h,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。1支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液或菌悬液0.5ml作阳性对照，另1支加入营养肉汤或0.9％无菌氯化钠溶液0.5ml作阴性对照。

四、检验和控制1.金黄色葡萄球菌的检验样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10-1稀释液。增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°C培养24小时。分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板，置37°C培养24-48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2-3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带。

金黄色葡萄球菌计数上海城建职业学院曲瑞丹培训中心《食品安全标准》食品质量与安全专业教学资源库TeachingResourceLibraryofFoodQualityandSafety

第一法BairdParker平板法第二法MPN法第三法PetrifilmTM测试片法

第一法BairdParker平板法

检验程序

典型菌落计数与计算公式的应用计数范围要求：选择合计菌落数在20~200的平板，计数典型菌落。

公式一的使用范围：最低稀释度平板的菌落小于20cfu，计数该稀释度平板上的典型菌落；某一稀释度平板的菌落大于200cfu且有典型菌落，但上一稀释度平板上没有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落；某一稀释度平板的菌落大于200cfu且有典型菌落，且上一稀释度平板上有典型菌落，其平板上的菌落数不在20cfu～200cfu之间，计数该稀释度平板上的典型菌落；

公式一T=AB/CdT:样品中金黄色葡萄球菌落数；A:某一稀释度典型菌落的总数；B:某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数；C:某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数；d:某一稀释度。

公式应用例一样品稀释度10－110－2典型菌落数66，646，6用于做血浆凝固酶菌落数55血浆凝固酶阳性菌落数44公式一：T=AB/CdT=65×4÷5÷0.1=520高、低稀释度平板均有典型菌落，但其中高稀释度二平板的菌落数均不在20~200之间，选择低稀释度的平板进行计数。

公式二N=∑T/1.1d∑T：两个稀释度平板上确认的金黄色葡萄球菌菌落总数之和；d：稀释因子(第一稀释度)。公式二的使用范围：平板菌落数均在20cfu～200cfu之间。公式引用于ISO6888-1:1999(E)

公式应用例二样品稀释度10－110－2典型菌落数185，18020，22用于做血浆凝固酶菌落数55血浆凝固酶阳性菌落数34公式二：N=∑T/1.1dT1=183×3÷5=110T2=21×4÷5=17∑T=T1+T2=110+17=127N=∑T/1.1d=127÷1.1÷0.1=1200所有稀释度平板合计菌落数均在20~200间：

结果报告单位：cfu/g或者cfu/mL；若T或者N为0，报告1d-1cfu/m