生物芯片技术.pptVIP

作业：1.生物芯片的概念。2.简述Sanger双脱氧链终止法测序的基本原理.3.2-DE的基本操作步骤是什么?蛋白质芯片的应用举例：利用蛋白质芯片进行肿瘤诊断的一般原理程序思考题1、常见的基因芯片合成方法有A.原位合成和直接点样法B.光引导原位合成和喷墨合成C.原位合成和在片合成D.分子印章压印合成和在片合成E.离片合成直接点样2、关于表达型芯片探针的设计，下列哪项是正确的A.需要知道待测样品中靶基因的精确细节B.序列的特异性要放到首要位置C.对于同一目的基因不可设计多个序列不相重复的探针D.序列一般来自已知基因的cDNA但不能来自EST库E.表达型基因芯片对基因的表达差异不能进行定量检测3、设计检测DNA序列变异的探针时A.检测变化点应该对应于探针的中心B.长度为N个碱基的突变区就需要4N+1个探针C.一组探针包括两个野生型探针和两个突变型探针D.该探针能对某一段核酸序列所有可能的SNPs位点进行扫描E.一般采用等长移位设计法4、DNA芯片技术的临床应用不包括A.疾病的诊断B.药物的筛选C.指导个体用药D.基因突变的检测E.用于蛋白质翻译后修饰的改变而引起的疾病的检测5、DNA芯片技术的本质是A.核酸分子杂交技术B.蛋白质分子杂交技术C.聚合酶链式反应D.基因重组技术E.酶切技术生物芯片技术（biochips）生物芯片（biochips）——指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中的靶分子杂交，通过特定的仪器对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。生物芯片的特点：高通量（一张芯片同时可分析上千万的分子）微型化（可装入口袋）自动化（技术自动化；结果分析自动化）低成本（相对于同时进行大量分子研究而言）生物芯片的分类：根据芯片上固定的探针种类不同：DNA芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片。根据芯片的用途不同：表达型芯片、测序芯片和芯片实验室根据原理和最终检测载体不同：固相芯片和液相芯片基因芯片（Genechip）又称为DNA微阵列（DNAMicroarray）或DNA芯片（DNAchip）。将大量的基因探针分子固定于支持物上，然后与经过标记的样品DNA进行杂交，探针能够在基因混合物中识别出特定基因，最后通过检测杂交信号的强度及分布来对特定基因进行分析。DNA芯片用途表达谱芯片（最常用）基因组芯片诊断芯片检测芯片寡核苷酸芯片cDNA芯片应用不同结构不同DNA芯片技术包括四个主要步骤芯片的设计与制备样品制备杂交反应和信号检测结果分析一、芯片制备DNA芯片制备主要包括两个方面探针的设计：根据应用目的不同，设计不同的固定于芯片上的探针探针在芯片上的布局：选择合适的方式将探针排布在芯片上（一）探针的设计1.表达型芯片探针的设计不需要知道待测样品中靶基因的精确序列的特异性应放在首要位置2.单核苷酸多态性检测芯片探针的设计等长移位设计法3.特定突变位点探针的设计叠瓦式策略一、芯片制备一、芯片制备图10－2（二）DNA芯片的制备

1.载体选择与预处理2.DNA芯片制备（1）原位合成（insitusynthesis）①光导原位合成法②原位喷印合成③分子印章多次压印合成（2）点样法一、芯片制备原位合成法和直接点样法的比较——与一般的核酸提取比较类似，只不过为了降低污染和提高检测灵敏度增加了纯化、扩增（PCR）和标记。生物素常用标记物：荧光素待测样品（用Cy3-dUTP标记）对照样品（Cy5-dUTP）二、样品制备——是已标记的样品与芯片上的探针进行反应后产生一系列信息的过程。与传统的核酸分子杂交相同，但要求更高：选择合适的反应条件、减少生物分子之间的错配率。考虑杂交反应体系中盐浓度、探针GC含量和所带电荷、探针与芯片之间连接臂的长度及