大环内酯类抗生素.ppt

一、生产菌种一、生产菌种菌种特征：红霉素链霉菌在合成琼脂培养基上生长的菌落，是由淡黄色变为微带褐的红色菌种选育：快中子效果最好。侧重抗噬菌体菌株的选育。第29页,共47页，2024年2月25日，星期天二、发酵工艺及控制要点砂土孢子——→母斜面————→子斜面————→种子罐———————→繁殖罐——————→发酵罐——————→发酵液——→提炼

红霉素发酵一般采用孢子悬液接入种子罐，经二级种子扩大培养后移入发酵罐、利用分批补料的方式，进行发酵生产。第30页,共47页，2024年2月25日，星期天1．孢子制备及控制要点孢子培养一般采用淀粉、玉米浆、硫酸铵等琼脂斜面培养基，37℃，培养7-8d，长成熟。应该避光培养。孢子培养基中的配比适当与斜面孢子的质量和菌种的发酵单位有重要的关系。琼脂本身的质量对孢子质量和数量也有重要的影响，而这一点常常为人们所忽视。第31页,共47页，2024年2月25日，星期天2．种子培养及控制要点种子培养是采用淀粉、葡萄糖、黄豆饼粉、硫酸铵和碳酸钙等组成的培养基。各级种子于28-35℃进行培养，经一定时间后，种子生长成熟，即可加入发酵罐。种子培养基的成分和质量对孢子发芽和种子质量有重要关系，种子质量还与种子培养时消耗功率的大小有明显关系。第32页,共47页，2024年2月25日，星期天3．发酵生产及控制要点红霉素发酵一般都使用复合培养基：淀粉、葡萄糖为碳源；黄豆饼粉、硫酸铵为氮源以碳酸钙作缓冲剂；丙酸作为前体。接种量为10％。培养温度为28—35℃，pH值为7。第33页,共47页，2024年2月25日，星期天(1)培养基碳源：发酵培养基最适碳源是蔗糖，各种碳源的效果大小的顺序为，蔗糖＞葡萄糖＞淀粉＞糊精。采用葡萄糖和淀粉的混合碳源，其效果与使用蔗糖是相似的。氮源：黄豆饼粉、玉米浆比较好。前体：丙酸，流加正丙醇，如表5-5.无机盐：铁盐有抑制作用。以P、Mg为最主要，对促进前体的生长和生物合成有显著影响。第34页,共47页，2024年2月25日，星期天(2)发酵条件控制通气量的影响。在稀薄培养基中，通气效率较好，能够满足菌的需氧量，所以红霉素的生物合成不受通气的影响。但在丰富培养基中，红霉素的产量则随通气速率的增加而提高。pH值的影响：红霉素链霉菌生长的最适pH值为6．6—7．0，而红霉素合成的最适PH值为6．7—6．9。当PH6.3时，红霉素部分失效，再低下时，生物合成停止当PH高于7.2时，菌丝很快自溶，同时导致C组分上升，对产品质量影响很大。二氧化碳的影响：有明显的抑制红霉素生产的作用。第35页,共47页，2024年2月25日，星期天三、提取和精制第36页,共47页，2024年2月25日，星期天1、萃取剂的选择（1）有机溶剂的选择：醋酸丁酯、二氯乙烷、氯仿、二氯甲烷。（2）缓冲溶液：醋酸、草酸、硼酸、柠檬酸。2、pH的选择：pH9-10用醋酸丁酯萃取，然后再pH4-5用磷酸缓冲液反萃取，萃取选择性最高，红霉素最纯。3、成盐：红霉素乳酸盐。第37页,共47页，2024年2月25日，星期天第三节利福霉素类抗生素利福霉素是1975年由意大利Lepetit研究室Sensi等发现的，他们从地中海拟无枝酸菌的培养液中可以得到利福霉素A、B、C、D、E五种组分。利福霉素成员虽多，但抗菌活性不一，有实用价值者甚少。第38页,共47页，2024年2月25日，星期天一、结构利福霉素各结构组分上的差异在于芳香核上侧链的不同。第39页,共47页，2024年2月25日，星期天二、抗菌特性这类抗生素的毒性低、疗效高且抗菌谱较广，可特异性地与依赖DNA的RNA聚合酶作用，抑制细菌DNA的转录过程；而且对肿瘤RNA病毒的依赖RNA的DNA逆转录酶有抑制作用。广泛应用于治疗G＋(革兰氏阳性菌)、结核病、麻风病和与艾滋病有关的分枝杆菌感染。第40页,共47页，2024年2月25日，星期天三、利福霉素SV的生产工艺（一）生产菌种利福霉素产生菌是1975年米兰研究室从法国拉斐尔植物园土样中分离筛选获得，当时将其分类为地中海链霉菌，属于放线菌。后来根据生物化学分类法划入诺卡式菌属（因其细胞壁化学组成有消旋二氨基康二酸、阿拉伯糖、半乳糖）。第41页,共47页，2024年2月25日，星期天（二）发酵过程及工艺要点第42页,共47页，2024年2月25日，星期天1、培养基碳源：甘油和葡萄糖。氮源：黄豆饼粉，蛋白胨。无机盐：硝酸盐较好。前体：丙酸盐。0.07%。第43页,共47页，2024年2月25日，星期天2、培养条件培养温度为28℃，pH7.0-7.3。发酵培养：