噬菌体表面展示技术.ppt

关于噬菌体表面展示技术一、定义噬菌体展示技术(PhageDisplayTechniques,PDT)是一项筛选技术，将外源多肽或蛋白与噬菌体的衣壳蛋白融合表达，融合蛋白展示在病毒颗粒的表面，而编码该融合子的DNA则位于病毒粒子内。使大量多肽与其DNA编码序列之间、表型与基因型之间建立了直接联系，使各种靶分子（抗体、酶、细胞表面受体等）的多肽配体通过淘选得以快速鉴定。表型————基因型展示肽————编码基因第2页,共20页，2024年2月25日，星期天二、发展简史

Smith在1985年首次证实外源DNA可以插入丝状噬菌体基因III中，并与pIII蛋白融合展示。

SmithGP.Science1985;228:1315-7第3页,共20页，2024年2月25日，星期天1985第一次发表噬菌体展示技术；展示多肽SmithGP.Science.1985;228:1315-71988噬菌质粒系统1990抗体片段的展示1993展示cDNA文库1994/1995研发了‘phagetwo-hybrid’技术1996首次体内invivo淘选试验1998噬菌体展示载体作为基因导入载体1999Combinationofphagedisplaywithhigh-densityarrays2001AutomatedphagedisplayselectionKillingcancercellsbytargeteddrug-carryingphagenanomedicinesPublished:3April2008BMCBiotechnology2008,8:37doi:10.1186/1472-6750-8-37第4页,共20页，2024年2月25日，星期天三、噬菌体展示的基本原理基本原理在噬菌体衣壳蛋白基因中插入外源基因，形成融合蛋白表达在噬菌体颗粒蛋白的表面，被展示的多肽或蛋白质可保持相对独立的空间结构和生物学活性。第5页,共20页，2024年2月25日，星期天利用靶分子，采用适当的淘洗方法（亲和→洗脱→扩增→亲和的循环步骤），洗去非特异结合的噬菌体，最终从噬菌体文库中筛选出能结合靶分子的目的噬菌体；外源多肽或蛋白质表达在噬菌体的表面，而其编码基因作为病毒基因组中的一部分可通过噬菌体DNA序列测序出来，使得表达蛋白（表现型）和编码基因（基因型）之间完美地结合起来，为生物科学提供高效而实用的研究手段。第6页,共20页，2024年2月25日，星期天四、噬菌体表面展示的步骤不同基因分别被插入噬菌体基因组中分离纯化的噬菌体只是展示一个蛋白，多肽或者抗体。收集所有的噬菌体就构成一个文库将噬菌体文库与靶蛋白相互作用，筛选能与靶蛋白相互作用的噬菌体第7页,共20页，2024年2月25日，星期天目前，能用于蛋白质/多肽展示的噬菌体系统有丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统和T7噬菌体展示系统。其中丝状噬菌体展示PⅢ系统单价展示，可以筛选高亲和力配体，PⅧ系统拷贝数高，利于疫苗的研制，但丝状噬菌体分泌释放，不易展示大分子蛋白；λ噬菌体展示和T4噬菌体展示系统容量大，拷贝数高，但不易筛选高亲和配体；T7展示系统可以高、中、低拷贝地展示不同分子量的蛋白质，是目前最为理想的展示系统。第8页,共20页，2024年2月25日，星期天五、噬菌体展示技术的应用现状噬菌体抗体库技术噬菌体抗体库技术模拟了机体免疫系统的选择作用，呈现在噬菌体表面的抗体能够在体外用固相化抗原进行筛选，同时由于噬菌体对大肠杆菌的感染性，噬菌体抗体库技术能够以淘筛的方式，为快速选择特异性抗体提供简便而高效的操作系统。第9页,共20页，2024年2月25日，星期天疫苗：与传统的质粒DNA疫苗相比,利用噬菌体展示技术研制基因工程疫苗具有独特的优势：噬菌体传递的DNA疫苗诱生的抗体应答持续时间更长,滴度更高；噬菌体有强的免疫原性，是天然的免疫佐剂；噬菌体疫苗在对核酸酶的稳定性方面的优势明显，而且噬菌体疫苗能直接靶向抗原提呈细胞，使用比质粒DNA疫苗低得多的剂量就能诱发很好的免疫效果。第10页,共20页，2024年2月25日，星期天3.多肽类药物：如一些激动剂或拮抗剂从多肽库中分离鉴定出来；已获得一13肽，它能中和蛇毒α-bungarotoxin；