实验一、氨基酸纸层析.ppt

实验一氨基酸的分离鉴定——纸层析法（paperchromatography）实验目的掌握氨基酸纸层析的方法、原理掌握分析待测样品的氨基酸成分通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理、操作方法分子筛层析亲和层析离子交换层析高效液相色谱（HPLC）气相色谱（GC）实验原理滤纸作为惰性支持物的分配层析（并存吸附、离子交换）滤纸纤维的羟基具亲水性吸附一层水作为固定相通常把有机溶剂作为流动相有机相流经固定相物质在两相间不断分配→→→分离溶质分配系数100mgKd=10.0980.1961.7597.03216.40724.6124.6116.4077.0321.7590.1960.0980.3910.7811.5623.1256.2512.525501000.9783.1265.4699.37515.6252537.550504.40010.93816.40723.43831.2537.537.52511.72021.87627.34431.2531.252512.520.50927.34427.34423.43815.6256.2524.6121.87616.4079.3753.12520.50910.9385.4691.56211.7203.1260.7814.4000.3910.978100mgKd=35.620.000.010.120.663.8611.7123.5030.2624.527.500.000.000.010.020.100.391.566.25251000.000.030.100.371.464.6914.0637.5750.030.421.103.308.7921.0842.1856.250.262.265.7813.1826.3642.1942.191.468.6617.3029.6639.5531.645.6820.8631.5435.5923.7314.6631.4431.1417.8025.2826.7013.3528.8310.0120.260.0980.0980.9784.40011.72020.50924.6120.50911.7204.4000.978100mgKd=15.620.000.000.030.261.465.6814.6625.2828.8320.26100mgKd=320.50924.6120.50925.2828.8320.26K=18次分配，各试管中溶质分配结果A:K=1B:K=3C:K=0.33迁移率（Rf）：溶质在滤纸上的移动速率一定条件下，某物质的Rf是一个常数物质的结构性质溶剂系统层析纸质量pH层析温度等影响Rf大小的因素盐分、杂质、点样过多等——影响样品的有效分离试剂和器材试剂：扩展剂：0.1%茚三酮的正丁醇-醋酸-水（4:1:5）标准氨基酸（0.5%）：His、Gly、Phe待测氨基酸（0.5%）器材：层析缸或大标本缸、微量进样器、新华一号滤纸、电吹风实验操作1、平衡：将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中2、滤纸制作：层析滤纸（15*15cm）下端距边缘2cm处用铅笔划一条直线直线上每隔2cm作4个记号（原点）3、点样：均匀点样于原点，Gly、Phe、His、待测样品每点点2～3次，每次干后再点每点在纸上扩散的直径最大不超过5mm**