第三十四章 DNA的复制和修复课件.pptVIP

第三十四章

DNA的复制和修复;遗传信息传递的中心法则

;第一节DNA的复制;DNA的半保留复制的概念

;在1958年由M.Meselson和F.Stahl所完成的实验证明。将大肠杆菌在含15N的培养基中培养约十五代，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代、三代。分别提取DNA，作密度梯度离心，可得到下列结果：;大肠杆菌长期在15N标记的

15NH4CL培养液中生长15代;DNA的半保留复制实验依据;DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点。在原核生物中，复制起始点通常为一个，而在真核生物中则为多个。;1、环状双链DNA分子;2、线状双链DNA分子;滚环复制

φX174，M13，G4等单链环状DNA噬菌体第二阶段复制都是滚环复制。

;D环复制

线粒体DNA为D环复制。

;三、DNA聚合反应有关的酶;图示为Klenow片段与DNA的结合，模板链(12nt)为蓝色，引物链(14nt)为红色。;1、DNA聚合反应和聚合酶;DNA聚合酶催化的链延长反应;功能;第三十四章DNA的复制和修复;DNA聚合酶的3?-5?外切酶水解位点;polⅠ为单一肽链的大分子蛋白质,可被特异的蛋白酶水解为两个片段，其中的大片段称为Klenowfragment，具有5→3聚合酶活性和3→5外切酶的活性。;DNA聚合酶Ⅲ全酶;3、DNA连接酶

DNA连接酶(DNAligase)可催化两段DNA片段之间磷酸二酯键的形成，而使两段DNA连接起来。;DNA连接酶催化的条件：

①需一段DNA片段具有3‘-OH，而另一段DNA片段具有5’-Pi基

②未封闭的缺口位于双链DNA中，即其中有一条链是完整的

③需要消耗能量，在原核生物中由NAD+供能，在真核生物中由ATP供能。

;连接酶连接切口;五、DNA复制的拓扑性质;

拓扑异构酶Ⅰ主要和转录有关。

拓扑异构酶Ⅱ主要与复制有关。

拓扑异构酶Ⅱ引入负超螺旋可以消除复制叉前进时带来的扭曲张力。

;六、DNA生物合成过程;解螺旋酶

解螺旋酶（unwindingenzyme），又称解链酶或rep蛋白，是用于解开DNA双链的酶蛋白，每解开一对碱基，需消耗两分子ATP。目前发现存在至少存在两种解螺旋酶。;单链DNA结合蛋白

单链结合蛋白（singlestrandbindingprotein,SSB）又称螺旋反稳蛋白（HDP）。这是一些能够与单链DNA结合的蛋白质因子。其作用为：①使解开双螺旋后的DNA单链能够稳定存在,，便于以其为模板复制子代DNA；

②保护单链DNA，避免核酸酶的降解。;（2）．引发体组装：

由蛋白因子（如dnaB等）识别复制起始点，并与其他蛋白因子以及引物酶一起组装形成引发体。

;*引发体

引发体(primosome)由引发前体与引物酶（primase）组装而成。

引发前体是由若干蛋白因子聚合而成的复合体。在原核生物中，引发前体至少由六种蛋白因子构成。蛋白i、蛋白n、蛋白n”、蛋白dnaC与引物预合成有关，蛋白n’与蛋白dnaB与识别复制起始点有关，并具有ATPase活性。

引物酶本质上是一种依赖DNA的RNA聚合酶（DDRP），该酶以DNA为模板，聚合一段RNA短链引物(primer)，以提供自由的3-OH，使子代DNA链能够开始聚合。;大肠杆菌复制起点成串排列的重复序列

;2、引发：

在引物酶的催化下，以DNA为模板，合成一段短的RNA片段，从而获得3端自由羟基（3-OH）。;RNA引物

参与DNA复制的DNA聚合酶，必须以一段具有3’端自由羟基（3’-OH）的RNA作为引物(primer)，才能开始聚合子代DNA链。

RNA引物的大小，在原核生物中通常为50～100个核苷酸，而在真核生物中约为10个核苷酸。RNA引物的碱基顺序，与其模板DNA的碱基顺序相配对。;复制的起始;（二）、复制的延长;2、引发体移动：

引发体向前移动，解开新的局部双螺旋，形成新的复制叉，随从链重新合成RNA引物，继续进行链的延长。;*冈崎片段和DNA的半不连续复制;以3→5方向的亲代DNA链作模板的子代链在复制时基本上是连续进行的，其子代链的聚合方向为5→3，这一条链被称为领头链(leadingstrand)。而以5→3方向的亲代DNA链为模板的子代链在复制时则是不连续的，其链的