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荧光素的生物进化和生物合成

一概述

自然界中主要的发光生物，都生活在海洋中，陆生的发光生物主要是Lampyridae和一些与Lampyridae亲缘关系较近的甲虫。这种发光行为可能由一种不太成熟的弱发光机制进化而来。也可能由一种完全不相关的机制或某种突然的地质演变进化而来。要解决这个问题，我们不仅要对生物发光的生化机制有充分了解，还要对荧光素和荧光素酶的生物进化有充分的了解。对于荧光素酶的生物进化我们可以对已知的荧光素酶基因进行比对而获得。目前我们能够收集到的关于荧光素和荧光素酶的发光机制和荧光素酶的资料还是不少，但是关于荧光素的生物进化我们还了解的很少。解决荧光素的生物合成对于了解荧光素的生物进化是至关重要的。还能完善生物荧光的报告子系统，更有利于我们推广荧光素酶-荧光素的报告子系统。这里总结了最近几年在荧光素的生物进化和生物合成上的进展。

二生物荧光的起源在众多的发光生物中，发光的颜色，发光方式，发光生化反应都是不同的。早期的研究者都认为发光生物的这种发光机制在进化上是不保守的。

2.1生物荧光的作用引诱猎物性信息的交流警戒信号伪装色保护色还有其他一些作用暂时还不了解

2.2反应活性氧假说生化反应中只有氧化反应能够提供足够的能量使生物发光。荧光素只有在被氧化状态下才能提供释放的量子能。因此研究者都认为生物荧光起源于荧光素的氧化。反应活性氧通常由氧分子（这里包括氢氧根，过氧化物，超氧化物）衍生而来。这一假说首先应用于发光细菌的进化。基于以上发光反应，使生态上获利的物种倾向于向更加亮的生物荧光进化。事实上反应活性氧在发光反应中是必须的并不表明活性氧是驱使生物荧光进化的原动力。（很多不发光的生物也具有活性氧）

2.3荧光素的进化对于荧光素酶的进化，我们可以从获得荧光素酶基因的序列来获得。而对于荧光素的进化情况就很复杂了。大量的发光生物只具有少量的几种荧光素。目前已知的有五种荧光素。

萤火虫荧光素

细菌荧光素

dinoflagellate荧光素

Vargula（介形亚纲动物，一些鱼类）荧光素

copepods,squids,cnidarians,ctenophores,radiolarians,fish,mysidshrimpsandchaetognaths

在一些生物中，它们能从自身的一些简单代谢物直接合成荧光素。这样它们就要有一整套合成荧光素的酶，目前已经发现原核生物Vibrioharveyi能够自身合成荧光素。其他生物可能从食物中获取基础代谢物来合成荧光素，如：Aequoreavictoria以coelenterazine为食而获取荧光素。因此生物获取荧光素有以下三种途径：（1）自身合成（2）从其他生物获取（3）从其他生物获取基本底物再自身合成

三双功能酶（虫荧光素酶）目前研究最多的虫荧光素酶是北美的Photinuspyralis荧光素酶。这种酶有550个Aa，分子量为61kd。在有ATP，氧气，镁离子存在的情况下，它能催化荧光素的氧化脱羧。整个反应的过程如下图：

荧光素与荧光素酶的催化反应

与虫荧光素酶具有最大同源性的是co-enzymeA(CoA)ligases，这些酶都具有一个共同的特点，都能对羧酸进行腺苷酸化，形成活化的腺苷酸。萤火虫荧光素酶就是对荧光素和腺苷酸的连接使腺苷酸活化。因此荧光素酶具有co-enzymeA(CoA)ligases活性。

事实上化学合成的luciferyl–adenylate在没有荧光素酶存在下就具有发光的本能，这表明luciferyl–adenylate是一种具有自发氧化发光的化学物质。因此荧光素酶的最基本功能是将luciferin腺苷酸化。最近的证据也表明虫荧光素酶是一个全功能的脂肪酸CoA连接酶。

脂肪体假说根据以上荧光素酶具有的脂肪酸CoA连接酶性，我们可以假定萤火虫的发光器官就是它的脂肪体。在发光细胞的过氧化物体里荧光素酶同时起着催化脂肪酸的降解和催化荧光素氧化的双重功能（单氧化酶活性）。荧光素酶对脂肪酸有某种偏好。事实上虫荧光素就是一种特异的脂肪酸。证据：陆生昆虫中的arachidonicacid含量很少，但是在萤火虫的发光器官中arachidonicacid具有很高的含量。

萤火虫荧光素酶的祖先形式可能只作为一种脂肪酸CoA的连接酶，参与脂肪酸的代谢。直到荧光素的出现才作为单氧化酶氧化荧光素发光。间接证据：mealwormTenebriomolitor(Coleoptera:Tenebrionidae)是一种与Lampyridae昆虫亲缘关系较远的不发光生物。但是它的蛋白抽提物能催化虫荧光素发光。这表明mealworm中有一种功能与荧光素酶功能相近的酶。这种酶也与它的脂肪体有关，可能这种酶