免疫实验技术.ppt

酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法Ag待检血清酶标抗抗体检测抗体双抗体法Ag检测抗原待检抗原抗原竞争法Ag待检抗原酶标抗原Ag检测抗原第21页,共24页，2024年2月25日，星期天2、胶体金免疫技术以胶体金为标记物的抗原抗体反应。常与膜载体技术结合，包括斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验等。斑点金免疫层析试验(dotgoldimmunochromatographicassay，DICA)以硝酸纤维素膜为载体如早早孕试验第22页,共24页，2024年2月25日，星期天第23页,共24页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第24页,共24页，2024年2月25日，星期天关于免疫实验技术利用免疫学原理来检测抗原、多种免疫分子(抗体、补体、细胞因子和粘附分子等)及免疫细胞的实验过程。有助于疾病的辅助诊断、治疗及预后判断。第2页,共24页，2024年2月25日，星期天一、凝集反应颗粒性抗原（细胞、细菌等）或吸附于免疫无关载体上的可溶性抗原与相应抗体，在适量电解质的存在下，形成肉眼可见的凝集团块。1、直接凝集反应（1）玻片凝集试验ABO血型鉴定（2）试管凝集试验肥达试验效价（滴度）：以出现明显抗原抗体反应现象的最高稀释度作为待检抗原（或抗体）的含量。第3页,共24页，2024年2月25日，星期天凝集反应（agglutination)颗粒型抗原细菌、细胞＋抗体（凝集素）电解质（生理盐水）＋37℃～50℃数小时凝集反应（凝集成团）第4页,共24页，2024年2月25日，星期天1.直接凝集试验玻片法试管法含有已知抗体的诊断血清待检菌液生理盐水特点简便、快速不能定量UUUU待检血清盐水简便、快速能定量肥达氏试验（widaltest)伤寒、副伤寒已知抗原第5页,共24页，2024年2月25日，星期天ABO血型鉴定红细胞表面抗原抗A抗体抗B抗体血型A+-AB-+BH--OA,B++AB第6页,共24页，2024年2月25日，星期天2、间接凝集反应指可溶性抗原(或抗体)吸附在乳胶颗粒或红细胞等载体表面与相应抗体(或抗原)结合反应，在适宜的条件下，出现凝集现象。正向间接凝集反应用可溶性抗原包被载体以检测抗体。反向间接凝集反应用抗体包被载体以检测抗原。第7页,共24页，2024年2月25日，星期天第8页,共24页，2024年2月25日，星期天二、沉淀反应可溶性抗原与相应抗体结合，当两者比例合适，并有适量电解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线。第9页,共24页，2024年2月25日，星期天沉淀试验（precipitationtest）可溶性抗原细胞裂解液＋抗体（沉淀素）电解质（生理盐水）＋37℃～50℃数小时沉淀反应（清澄液中出现混浊沉淀）第10页,共24页，2024年2月25日，星期天沉淀反应分类（1）琼脂扩散试验a.单向琼脂扩散试验b.双向琼脂扩散试验（2）免疫电泳试验对流免疫电泳：原理：在阴极孔内加抗原，阳极孔内加抗体。通电后，抗原带负电荷较多，分子较小，向阳极泳动；抗体分子带负电荷较少，加上分子量大，在琼脂的电渗作用下向阴极泳动。（3）环状沉淀试验第11页,共24页，2024年2月25日，星期天（1）单向扩散试验（Singleredialdiffusiontest）预先混有抗体第12页,共24页，2024年2