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9101分析方法验证指导原则

分析方法验证(analyticalmethodvalidat)io目的是证明建立的方法适合于相应检测要求。在建立药品质量标准、变更药品生产工艺或者制剂组分、修订原分析方法时，需对分析方法进行验证。生物制品质量控制中釆用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法，其中理化分析方法的验证原则与化学药品基本相同，所以可参照本指导原则进行，但在进行具体验证时还需要结合生物制品的特点考虑；相对于理化分析方法而言，生物学测定方法存在更多的影响因素，因此本指导原则不涉及生物学测定方法验证的内容。

验证的分析项目有：鉴别试验、杂质测定(限度或者定量分析)、含量测定(包括特性参数和含量/效价测定，其中特性参数如：药物溶出度、释放度等)。

验证的指标有：专属性、准确度、精密度(包括重复性、中间精密度和重现性)、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。在分析方法验证中，须用标准物质进行试验。由于分析方法具有各自的特点，并随分析对象而变化，因此需要视具体情况拟订验证的指标。表1中列出的分析项目和相应的验证指标可供参考。

①已有重现性验证，不需验证中间精密度。

②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。

③视具体情况予以验证。

方法验证内容如下。

一、专属性

专属性系指在其他成份(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，采用的分析方法能正确测定出被测物的能力。鉴别反应、杂质检查和含量测定方法，均应考察其专属性。如方法专属性不强，应采用一种或者多种不同原理的方法予以补充。

1.鉴别反应

应能区分可能共存的物质或者结构相似的化合物。不含被测成份的供试品，以及结构相似或者组分中的有关化合物，应均呈阴性反应。

2.含量测定和杂质测定

采用的色谱法和其他分离方法，应附代表性图谱，以说明方法的专属性，并应标明诸成分在图中的位置，色谱法中的分离度应符合要求。

在杂质对照品可获得的情况下，对于含量测定，试样中可加入杂质或者辅料，考察测定结果是否受干扰，并可与未加杂质或者辅料的试样比较测定结果。对于杂质检查，也可向试样中加入一定量的杂质，考察杂质之间能否得到分离。

在杂质或者降解产物不能获得的情况下，可将含有杂质或者降解产物的试样进行测定，与另一个经验证的方法或者药典方法比较结果。也可用强光照射、高温、高湿、酸(碱)水解或者氧化的方法进行强制破坏，以研究可能的降解产物和降解途径对含量测定和杂质测定的影响。含量测定方法应比对两种方法的结果，杂质检查应比对检出的杂质个数，必要时可采用光电二极管阵列检测和质谱检测，进行峰纯度检查。

二、准确度

准确度系指用所建立方法测定的结果与真实值或者参比值接近的程度，普通用回收率(%)表示。准确度应在规定的线性范围内试验。准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。

在规定范围内，取同一浓度(相当于100%浓度水平)的供试品，用至少6份样品的测定结果进行评价；或者设计至少3种不同浓度，每种浓度分别制备至少3份供试品溶液进行测定，用至少9份样品的测定结果进行评价，且浓度的设定应考虑样品的浓度范围。两种方法的选定应考虑分析的目的和样品的浓度范围。

1.化学药含量测定方法的准确度

原料药可用已知纯度的对照品或者供试品进行测定，或者用所测定结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。制剂可在处方量空白辅料中，加入已知量被测物对照品进行测

定。如不能得到制剂辅料的全部组分，可向待测制剂中加入已知量的被测物进行测定，或者用所建立方法的测定结果与已知准确度的另一个方法测定结果进行比较。

2.化学药杂质定量测定的准确度

可向原料药或者制剂中加入已知量杂质对照品进行测定。如不能得到杂质对照品，可用所建立的方法与另一成熟方法(如药典标准方法或者经过验证的方法)的测定结果进行比较。

3.中药化学成份测定方法的准确度

可用已知纯度的对照品进行加样回收率测定，即向已知被测成份含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成份对照品，依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。在加样回收试验中须注意对照品的加入量与供试品中被测成份含有量之和必须在标准曲线线性范围之内；加入的对照品的量要适当，过小则引起较大的相对误差，过大则干扰成份相对减少，真实性差。

4.数据要求

对于化学药应报告已知加入量的回收率(％)，或者测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏差或者置信区间(置信度普通为95%)；对于中药应报告供试品取样量、供试品中含有量、对照品加入量、测定结果和回收率(%)计算值，以及回收率(%)的相对标准偏差(RSD%