【生物】基因工程的基本操作程序课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版(2019)选择性必修3.pptxVIP

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苏云金杆菌与载体拼接普通棉花(无抗虫特性)棉花细胞抗虫棉提取表达Bt基因导入Bt基因重组DNA分子培育转基因抗虫棉的简要过程问题探讨1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定(核心工作)

第2节基因工程的基本操作程序1基因表达载体的构建2目的基因的筛选与获取3将目的基因导入受体细胞4目的基因的检测与鉴定四个步骤:

基因表达载体的构建(核心)将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定目的基因的筛选与获取基因工程的基本操作程序有了目的基因,我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。使目的基因在受体细胞中稳定存在,并可进行遗传、表达和发挥作用。载体进入受体细胞稳定表达,才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。第2节基因工程的基本操作程序

目的基因的筛选与获取1.目的基因(1)概念:用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因;如:与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。主要是编码特定蛋白质的基因,也可以是具有调控作用的因子一资料:苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白(Bt抗虫蛋白),破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将“杀虫基因”转入棉花中,棉花产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。目的基因

思考:1.Bt抗虫蛋白的抗虫原理是什么?2.抗虫棉中的Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害?当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后,多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合,导致细胞膜穿孔,最后造成害虫死亡。Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性,而人和牲畜的胃液呈酸性,肠道细胞也没有特异性受体,因此,Bt抗虫蛋白不会对人畜产生上述影响

对Bt基因的表达产物-Bt抗虫蛋白有较为深入的了解Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因目的基因的筛选与获取2.筛选合适的目的基因方法:从相关的已知结构和功能清晰的基因中筛选。DNA测序仪核苷酸序列比对氨基酸序列比对越来越多基因的功能和结构被分析。一苏云金杆菌的杀虫作用于Bt基因有关掌握了Bt基因的序列信息苏云金杆菌制剂可防治棉花虫害实例:

利用PCR技术获取和扩增(重点)cDNA文库直接获取人工合成基因文库(P82了解)(化学合成法):根据测序技术或从GenBank等序列数据库中掌握了目的基因的序列后,用DNA合成仪进行人工合成基因组文库从生物体内用限制酶直接得到获取目的基因的具体方法3.目的基因的获取目的基因的筛选与获取一

基因组文库部分基因文库(主要是cDNA文库)基因文库:基因组文库:含有某种生物全部基因片段的重组DNA的克隆群体。(1)从基因文库中直接获取3.目的基因的获取目的基因的筛选与获取一部分基因文库:含有某种生物部分基因片段的重组DNA的克隆群体。

目的基因的筛选与获取一提取基因组DNADNA片段重组载体基因组文库限制酶与载体连接导入受体菌提取特定组织或发育时期的mRNA单链DNA重组载体cDNA文库双链cDNA导入受体菌与载体连接DNA聚合酶逆转录酶基因组文库中的基因含有启动子、终止子、内含子cDNA文库中的基因不含以上结构3.目的基因的获取

(2)人工合成DNA合成仪①前提:基因比较小、核苷酸序列已知②方法:通过DNA合成仪用化学方法直接合成目的基因3.目的基因的获取目的基因的筛选与获取一

提取苏云金芽孢杆菌抗虫基因?快速获得大量抗虫基因(3)利用PCR获取和扩增目的基因目的基因的筛选与获取一PCR——聚合酶链式反应PCR是一项根据DNA半保留复制的原理,在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件,对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。3.目的基因的获取

PCR由穆里斯等人于1985年发明,为此,穆里斯于1993年获得诺贝尔化学奖。

PCR技术:PCR是______________的缩写,是一项根据___________的原理,在____提供参与DNA复制的_______与______,对__________________进行________的技术;聚合酶链式反应DNA半保留复制体外各种组分反应条件目的基因的核苷酸序列大量复制全称聚合酶链式反应DNA半保留复制体外(PCR扩增仪/PCR仪)对目的基因的核苷酸序列进行大量复制可以在短时间内大量扩增目的基因原理操作环境目的优点(3)利用PCR扩增目的基因目的基因的筛选与获取一结合体内DNA复制过程,思考PCR的进行需要哪些条件?PCR扩增仪

温故知新:回顾DNA的复制过程体内DNA复制过程解旋酶DNA聚合酶体内DNA复制需要模板、原料、引物、酶、能量等引物目的基因的筛选与获取一

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