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EGFL7抑制NF-κB核转位减少高氧诱导的内皮细胞凋亡的开题报告

背景和意义：

糖尿病视网膜病变(Diabeticretinopathy,DR)是一种常见的糖尿病并发症，主要由于长期的高血糖导致视网膜的血管损伤所致。高氧诱导内皮细胞凋亡是DR发生和发展的重要机制。EGFL7是一种与血管生成和肿瘤生成有关的细胞因子，其表达水平在高氧诱导的内皮细胞凋亡中起到了重要的作用，但其具体的调控机制尚不清楚。

研究目的：

通过研究EGFL7在高氧诱导内皮细胞凋亡中的作用机制，揭示其与NF-κB核转位的关系，并探索其对NF-κB核转位的影响，以期为DR的治疗和预防提供新的思路。

研究方法：

1.构建EGFL7的慢病毒表达载体

从人体内皮细胞中提取RNA，逆转录为cDNA，利用PCR扩增EGFL7的基因片段，将其克隆到慢病毒载体中，构建EGFL7的慢病毒表达载体。

2.培养内皮细胞并高氧处理

收集人体血管内皮细胞，分别加入慢病毒表达载体及对照载体进行感染，待细胞稳定表达后，进行高氧处理，利用MTT法检测内皮细胞的存活率。

3.Westernblotting检测NF-κB水平及核转位

收集细胞，在不同时间点进行蛋白抽取，并采用Westernblotting方法检测内皮细胞NF-κB水平及其核转位情况。

4.检测内皮细胞的凋亡率

采用PI/AnnexinV-FITC双染法检测内皮细胞的凋亡率。

研究预期结果：

EGFL7能够抑制NF-κB核转位，并减少高氧诱导的内皮细胞凋亡。这一发现可能为DR的治疗和预防提供新的靶点和治疗方法。