病毒病实验室诊断—病毒的增殖与人工培养(动物微生物课件).pptx

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动物接种培养的应用:尚无敏感细胞的病毒培养。

;选择何种微生物等级的实验动物,也应根据各级动物的特点,结合课题研究的水平、内容及目的而定。

接种病毒后观察应每日至少2次,根据试验的目的不同,观察不同的反应情况。例如在进行新城疫诊断时需进行ICPI、IVPI。

;鸡胚培养

采用孵化9~12日龄的鸡胚

优点:易管理,操作简单,成本较低。

缺点:可能垂直传播,存在卵黄抗体干扰。

绒毛尿囊膜:痘苗病毒、人类疱疹病毒

尿囊腔:流感病毒、腮腺炎病毒

接种部位

羊膜腔:流感病毒的初次分离

卵黄囊:嗜神经病毒

;不同病毒对鸡胚敏感性不同。

直接法:生长发育情况,痘疹、痘斑,MDT。

间接法:尿囊液、羊水进行HA/HI。;细胞培养

贴壁细胞培养

悬浮细胞培养

原代细胞

细胞种类二倍体细胞

传代细胞系;离体的新鲜组织或器官,机械处理胰蛋白酶消化加入营养液

单个细胞悬浮细胞计数,调整细胞浓度分装培养

瓶内长成单层细胞,称为原代细胞。

将长成单层原代细胞胰蛋白酶消化转新的细胞培养瓶

形成单层细胞称次代培养。;二倍体细胞:

原代细胞多次连续传代后仍保持二倍体染色体特性(含23对染色体),称之为二倍体细胞。传代细胞寿命一般为40~50代,其广泛用于病毒的分离和疫苗的制备。

;细胞培养瓶;病毒在细胞内增殖所引起的特有的细胞病变,称为细胞病变效应(CPE)。;一般程序:;活细胞---严格寄生性(缺乏增殖所需的酶系统)

敏感细胞---选择性(亲嗜性);复制:即自我复制本身的成分,然后装配成病毒粒子。;;病毒复制的基本过程;吸附;穿入;囊膜与细胞膜融合;吞饮作用;脱壳;生物合成;有囊膜病毒的生物合成;;有囊膜病毒的释放

囊膜来自于细胞膜;正常的T.C

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