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效力检验(2)(3)抗原量的测定生物制品的热稳定性免疫原性与免疫的持续期(1)1.内容效力检验(1)(2)(3)活菌计数与病毒量的滴定血清学试验2.检验方法动物保护力试验效力检验(1)动物保护力试验是兽医生物制品特别是疫苗类制品最常用的检验方法。所用动物因制品而异。其试验方法很多,多采用攻毒法,并设立对照组。效力检验①定量免疫定量强毒攻击法将待检制品接种动物,2-3周后,用相应的强毒攻击,然后以被攻击动物的存活或不感染比例判定该制品的效力。效力检验例:猪丹毒弱毒菌苗的效力检验免疫小白鼠5只(每只注射含1000万个猪丹毒弱毒菌的苗)—14天后,连同3只以上未免疫小鼠各攻击1000个小鼠致死量的猪丹毒强毒菌。要求:免疫鼠存活4/5以上,对照组全部死亡,菌苗才为合格。效力检验②定量免疫变量攻击法把动物分免疫组和对照组,两大组又分为相等的若干小组。免疫组动物均用同一剂量接种,免疫经过一定时间后,与对照组同时用不同稀释倍数强毒攻击,比较免疫组与对照组的存活率和死亡率。效力检验例:狂犬病疫苗对照组攻击10-5稀释毒有50%动物死亡,而免疫组动物攻击10-3稀释度强毒有50%死亡。即免疫组对强毒的耐受力比对照组高100倍。即免疫组有100个LD50的保护力。效力检验③变量免疫定量攻击法将疫苗作不同稀释度并各免疫一定数量动物,经2-3周建立免疫后,各免疫组动物连同对照动物用用同一剂量强毒攻击,观察一定时间后统计存活和死亡数,用统计学方法计算能使50%的动物得到保护的免疫剂量。效力检验例:鸡新城疫油乳剂灭活苗选择3-4周龄敏感鸡35只,以1/25、1/50、1/100倍稀释疫苗——各皮下或肌肉注射10只鸡,每只0.5ml——另5只不免疫为对照。3-4周后,每只鸡肌肉注射105EID50的新城疫强毒,观察14天,按每组死亡数,对照组全死的结果计算出50%保护量(PD50)要求:该苗每一个使用剂量(0.5ml)的效价不低于50个PD50。效力检验④抗病血清的抗体效价测定将抗病血清注射易感动物,经一定时间(一般1-3天)用相应的强毒攻击,观察血清抗体被动免疫所引起的保护作用。效力检验例:抗炭疽血清12只豚鼠——分3组,每组4只——二组分别注射0.5ml和1.0ml——24小时后,连同不注射血清的对照豚鼠4只全部攻击致死剂量的芽孢液——如对照组7天内全部死亡,两免疫组存活6只以上,或对照组死亡3/4,免疫组全部健活时,血清为合格。效力检验(2)活菌计数与病毒量的滴定①活菌计数②病毒量滴定用细胞培养生产的疫苗多采用蚀斑计数、半数细胞感染量测定病毒量。效力检验(3)血清学试验主要用于诊断制品的检验。检验方法有凝集试验、沉淀试验、中和试验、补体结合试验等。例:用凝集试验检验布鲁氏菌虎红平板凝集抗原和阳性血清的效价。
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