shRNA沉默p115基因表达抑制胃癌血管生成的体外研究的开题报告.docxVIP

shRNA沉默p115基因表达抑制胃癌血管生成的体外研究的开题报告

背景：

胃癌在全球范围内都是一种普遍的恶性肿瘤，而血管生成是其发展和转移过程中不可或缺的因素。p115是一种与细胞膜的小GTP酶相关的蛋白，它可以调节细胞内信号通路，并且在许多肿瘤细胞中都高表达。之前的研究表明，p115对于肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等方面均有重要作用，然而其对于胃癌血管生成的影响尚不清楚。

研究目的：

本研究的目的是探究p115对胃癌血管生成的影响，并阐述其可能的分子机制。

研究方法：

1.环状siRNA合成：使用化学方法，将合成的核酸序列使用两个方向的引物进行扩增得到环状siRNA。

2.细胞培养：通过将人类胃癌细胞株MGC803放入培养液中，将其培养至80％的密度。

3.shRNA转染：将p115基因的shRNA进行转染，用药物物质如HyperscreenAstroFect转染试剂将其转染至培养的MGC803细胞中。

4.真核细胞的RNA提取和纯化：使用Trizol试剂将MGC803细胞取出，提取其RNA，对RNA进行纯化处理。

5.Real-timePCR:使用SYBRGreenMasterMix和p115基因的特异性引物对其进行实时PCR测定，对比测定未受转染和受到shRNA转染的MGC803细胞组。

6.细胞增殖检测：通过MTT法和克隆形成试验，在转染过程中观察p115的表达水平对MGC803细胞增殖中的影响。

7.蛋白质表达分析：使用免疫印记法观察p115基因的沉默对VEGF和CD31的表达的影响。

研究预期结果：

本研究将会验证p115在胃癌VEGF诱导血管增生和血管通透性方面的功能，其沉默会显著抑制胃癌细胞的增殖并且通过抑制VEGF表达，减少新生血管形成。预计p115表达水平的表达与胃癌的生长、转移程度密切相关，为早期胃癌的治疗提供一定的理论依据和权威参考。