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报告基因

定义

报告基因 (reportergene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说 ，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因 。把它的编码序列和基因表 达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控 制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛 选得到转化体。

特征

作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方 面必须具有以下几个条件：

已被克隆和全序列已测定；

表达产物在受体细胞中本不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物；

其表达产物能进行定量测定。

应用

在植物基因工程研究领域，已使用的报告 基因有以下几种：胭脂碱合成 酶基因(nos)、章鱼碱合成酶基因(ocs)、新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)、氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、庆大霉素转移酶基因、葡萄糖苷酶基因、荧光酶 基因等。nos、ocs这两个基因是致瘤土壤农杆菌(Agrobacteriumtumfaciens) 的Ti质粒特有的，对Ti质粒进行改造，用相应的致瘤农杆菌转化植物体时，如果外源基因 转入植物体中，则这两种报告基因在植物根茎叶中均能表达，不受 发育调控，检测时直接用转 化体提取液进行纸电泳，染色后在紫外光下观察荧光即可 。nptⅡ、cat及庆大霉素转移酶基因，均为抗生素筛选基因，相关的酶可以对底物进行修 饰(磷酸化、乙酰化等)，从而使这些抗生素失去对植物生长的抑制作用，使得含有这些抗性基因的转化体能 在含这些抗生素的筛选培养基上正常生长，也可以用转化体提取液体，外用 同位素标记，放射自显影筛选转化体。目前常用的一种报告基因是 β-D-葡萄糖苷酶基因，该酶 催化底物形成β-D-葡萄糖苷酸，它在植物体 中几乎无背景，组织化学检测很 稳定，可用分光光谱、荧光等进行检测。荧光酶基因(luc)是1985年从北美荧火虫和叩头虫 cDNA文库中克隆出来的，该酶在有ATP、Mg2＋、O2和荧光素存在下发出荧光，这样就可用转基因植物整株或部分直接用X-光片或专门仪器进行检测 。

在动物基因表达调控的研究中，报告 基因也被广泛应用。常用的 有氯霉素乙酰转

移酶基因(cat)、β-半乳糖苷酶基因(LacZ)、二氢叶酸还原酶基因、荧光酶基因等。cat基因作为报告基因，检测时可通过放射自显影观察。荧光酶 基因作为报告基因，具有

检测速度快、灵敏度比cat基因高30～1000倍、费用低、不需使用放射性同位素等

优点，得到了广泛的采用。

此外，在反式作用因子相互作用的检测方式枣酵母双杂交体系中，可通过报告基因的表达，研究蛋白质与蛋白质之间的相互作用。双杂交体系是由报告基因转录调控区、报告基因及一对可以相互作用的杂合反式作用因子组成。近年来从上述杂交体系中发展出的单一杂交体系技术，也是根据报告基因表达量的检测筛选出与已知顺式作用元件相结合的未知因子的DNA，该项技术正广泛应用于克隆细胞中含量微弱且用生化手段难以纯化的反式作用因子。

gus基因

gus基因就是转β-葡糖醛酸酶基因

该基因产物为GUS蛋白质，相当稳定而不易降解，并为一水解酵素，有简易的测定方法；且可使用市售的基质 (substrate) 在原位 (insitu) 显现出酵素的活性，以肉眼即可检测其产物，非常方便。

gus基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码 β-葡萄糖苷酸酶。β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。由于绝大多数植物没有检测到葡萄 糖苷酸酶的背景活性，因此 这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。根据地gus基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度 法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高），其中最为常用的是组织化学法。

组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X-Gluc）作为反应底物。将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡 ，若组织细胞发生了解 gus基因的转化，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将 X-Gluc水解生成蓝色产物，这 是由其初始产物经氧化二聚作用于形成的靛蓝染料，它使具 Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根 据染色深浅可反映出 Gus活性。因此利用该方法 可观察到外源基因在特定器官、 组织，甚至单个细胞内的表达 情况。

GUS作为报告基因的优缺点

采用报告基因是gu