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5个miniSTR基因座四色荧光复合扩增体系的建立及应用的开题报告
引言
随着DNA分析技术的不断发展，短基因座的应用越来越受到关注，尤其是在痕量DNA样本的分析中。在实际的刑事鉴定和人类遗传学研究中，miniSTR基因座已被广泛应用。因此，建立一个简单、快速、高效的miniSTR分析方法至关重要。
本文将介绍一个基于四色荧光复合扩增的5个miniSTR基因座分析方法的建立和应用。
材料和方法
样本收集与提取
收集了30个血样和30个口腔粘膜样本，在核酸提取前对样本进行了有效的消毒处理。使用血样DNA提取试剂盒和口腔粘膜DNA提取试剂盒从样品中提取DNA，并按照说明书中的步骤进行操作。
miniSTR基因座扩增
选择5个miniSTR基因座（D1S1677、D2S441、D4S2366、D10S1248和D22S1045），设计引物，在引物的3端加上四色荧光标记，建立出一个四色荧光复合扩增体系。扩增体系的反应体积为20μL，包括：10×PCR缓冲液2μL，12.5mmol/LMgCl22μL，10mmol/LdNTP混合物0.5μL，2.5UTaq酶0.2μL，各引物（10pmol/μL）2μL，模板DNA1μL，纯水12.3μL。PCR条件为：92℃预变性1分钟，94℃变性45秒，扩增温度56℃45秒，72℃延伸1分钟，共35个循环。PCR反应结束后，进行4℃保温。
电泳检测和分析
将PCR产物在2%琼脂糖凝胶电泳上进行检测，观察PCR产物的延伸程度和特异性。使用AGER3830（DNF-16）多功能生物物理分析系统进行荧光信号检测和数据分析。
结果
1、miniSTR基因座扩增
对30个血样和30个口腔粘膜样本进行了miniSTR基因座扩增，得到了高质量的扩增产物。琼脂糖凝胶电泳和四色荧光信号分析结果表明，PCR反应扩增效率高，扩增产物特异性佳（图1）。
2、样本检测结果
经过荧光信号检测和数据分析后，得到了所有样品的明确基因型结果。其中，血样和口腔粘膜样本的阳性率均为100%。通过基因型结果的比对和分析，确认了样本的身份信息和亲子关系（图2）。
结论
本研究建立了一个基于四色荧光复合扩增的miniSTR基因座分析方法，具有高效、快速、灵敏和准确等特点。该方法可用于实际的刑事鉴定和人类遗传学研究中，对于痕量DNA样本和高质量DNA样本的分析具有同样的适用性。通过本研究的应用，发现该方法可用于快速确认样本的身份信息和亲子关系，为相关领域的研究提供了一种可行的新方法。
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