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外植体材料的预处理、消毒及接种

（一）对采来的植物材料进行适当的预处理。除去不需要的部分，将所需部分切割至适当大

小，置自来水龙头下流水冲洗几分钟至几小时，主要视植物材料清洁程度而定。这在污染严

重时特别有用。

（二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100ml水）等浸洗上述植物材料约5min，再用自来水

冲净洗衣粉水。这是进一步减少污染的处理。

同时配消毒液：50%次氯酸钠溶液。

（三）将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从高压灭菌器中取出，置于超净工台

上。打开超净工台中的紫外灯，在进行紫外线灭菌处理至少30min后关掉紫外灯。

（四）操人员洗手擦干，换上洁净工服，戴上帽子以免头发散落以及带来污染。坐到超

净台前，并将装有经湿热灭菌培养基的培养瓶、配好的消毒液、洗净沥干的植物材料置于超

净工台上，用70%酒精棉球擦手与器具外壁，即可对经上述预处理的植物材料进行表面

灭菌处理，自此以后各步均须在超净工台上操。

（五）具体首先将经上述预处理、沥干水的植物材料放入广口瓶或烧杯，向其中倒入新鲜配

、浓度一定并且加有一定量（通常为灭菌剂消毒液的0.5%，或每100mL消毒液滴加10~15

滴）Tween-80（土温-80）等表面活性剂的消毒液适量（液面高度超出植物材料至少0.5cm），

开始计算灭菌时间。也可在使用上述灭菌剂之前，先将植物材料浸于70%乙醇灭菌10~30

秒。

（六）在持续灭菌时间内定时用玻璃棒轻轻搅动，以促进植物材料各部分与消毒液充分接触，

驱除气泡，使灭菌彻底。在灭菌时间结束前1min时，即可开始用玻璃棒等轻轻压住植物材

料将消毒液慢慢倒入废物缸，注意勿使植物材料滑出。接着立即倒入适量无菌水，轻搅植物

材料以清洗去除灭菌剂残留。一般表面灭菌时间的计算是从倒入消毒液开始，到倒入无菌水

为止。无菌水的清洗时间每次约3min；清洗5次。

（七）倒出、沥去最后一次清洗用水，开始进行植物材料的切割及接种。

逐一取出经上述灭菌处理的植物材料，置于下面垫有经灭菌处理的培养皿（或小白瓷碟）

的无菌纱布或滤纸上，左手拿小镊子，右手拿解剖刀，切除各切段或切块上被灭菌剂毒坏的

部分。如有必要，也可再行切分。在完成切割后，将解剖刀和小镊子在95%乙醇中浸蘸一

下，在酒精灯焰上灼烧灭菌之后放回原处，以便待冷却后下一切割再用。

（八）接着，左手拿培养瓶，将培养容器口外壁在靠近酒精灯外焰处转燎数秒，以将其可能

带有的微生物等固定于原处；在酒精灯焰附近处，用右手拇指与食指配合将瓶塞打开，并将

其夹于左手无名指与最小指之间；再将培养瓶口在酒精灯焰上轻转灼烧灭菌；以右手拇指与

食指配合，用大镊子夹紧一外植体准确送入培养容器，并将其轻轻地半插入固体培养基；将

大镊子在95%乙醇中浸蘸一下，在酒精灯焰上灼烧灭菌之后放回原处，以便待冷却后下一

操再用；将培养瓶口及瓶塞分别在酒精灯焰上小心地轻转灼燎数秒；盖好瓶塞，旋紧，将

其置于超净工台的适当位置。

（九）在完成了该第一只培养容器的外植体接种操后，用70%乙醇对超净工台的台面

进行擦拭灭菌，接着再进行第二只培养容器的外植体接种及超净台台面的灭菌，直至全部完

成。

MS培养基：

溶液I(g)20倍浓度溶液III(mg)40倍浓度

KO38FeSO7HO556

342

500mL

aEDTA

2

H4O333746

2HO