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KU80介导的EZH2磷酸化在DNA损伤反应中的功能研究的开题报告

一、研究背景和意义

DNA损伤反应是细胞应对内外部环境中引起DNA损伤的一系列复杂生化过程。细胞在遭受DNA损伤后，会启动DNA损伤反应，触发细胞周期停滞、DNA修复、凋亡等生理反应，以保证基因组的完整性和避免遗传疾病及癌症的发生。

KU80是DNA双链断裂（DSB）修复和V(D)J重组中必需的蛋白质，它参与免疫系统、神经发育、细胞凋亡等过程中的DSB修复。EZH2是Polycombrepressivecomplex2（PRC2）的核心蛋白，主要作用是催化组蛋白甲基转移酶的催化作用，从而引起组蛋白修饰和基因沉默。最近的研究发现，EZH2也参与DNA损伤反应，并通过与KU80相互作用参与DSB的修复。

在之前的研究中，发现EZH2通过磷酸化作用参与了DNA损伤反应。然而，KU80与EZH2之间的相互作用和在DNA损伤反应中的具体功能仍然不清楚。因此，本研究旨在探讨KU80介导的EZH2磷酸化在DNA损伤反应中的功能。

二、研究方法

利用免疫共沉淀（IP）和蛋白质质谱（MS）技术，分离纯化KU80和EZH2蛋白，并确定它们之间的相互作用。

构建靶向KU80的siRNA，通过Westernblot检测蛋白质的表达水平，验证siRNA的Knockdown效果。

使用细胞凋亡、裂解、细胞周期和流式细胞术等方法，复原和检测HeLa细胞中的DNA损伤反应和KU80、EZH2蛋白的作用。

应用ChIP-qPCR技术检测EZH2在DNA双链断裂（DSB）区域的富集情况，以及KU80介导的EZH2磷酸化是否影响EZH2的DSB区域富集。

三、预期结果

我们预计在HeLa细胞中发现KU80与EZH2之间的相互作用，并且KU80介导了EZH2的磷酸化作用。我们还预计检测到KU80介导的EZH2磷酸化在DNA损伤反应中的调节作用。在KU80knockdownHeLa细胞中，发现细胞DNA损伤反应受到了影响，表现出减少的细胞周期停滞和凋亡。同时，EZH2在DSB区域的富集水平也会受到影响。

四、意义和应用价值

本研究的结果将进一步深化我们对于DNA损伤反应调控机制的理解，揭示了KU80介导的EZH2磷酸化在DNA损伤反应中的具体功能，为发现新的治疗DNA损伤相关疾病的靶点提供重要基础。