从业人员健康检查 第4部分：重要肠道传染病致病微生物检验方法.pdf

从业人员健康检查

第4部分：重要肠道传染病致病微生物检验方法

1范围

本标准规定了从业人员健康检查粪便标本（肛拭子）中伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌、霍乱弧菌、志

贺氏菌和痢疾阿米巴等重要肠道传染病致病微生物的检验方法。

本标准适用于公共场所从业人员、食品生产和加工（食品生产）人员、食品流通和餐饮服务（食品

经营）人员、饮用水生产、经营人员健康检查项目中，粪便标本（肛拭子）的伤寒沙门菌、副伤寒沙门

菌、霍乱弧菌、志贺氏菌和痢疾阿米巴的检验。

其他相关行业从业人员，如从事医疗卫生用品生产、经营人员以及化妆品生产人员等，健康检查项

目中，粪便标本（肛拭子）的伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌、志贺氏菌、霍乱弧菌和痢疾阿米巴检验可参

照本标准执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验

GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求

WS/T230临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用

WS280伤寒和副伤寒诊断标准

WS287细菌性和阿米巴性痢疾诊断标准

WS289霍乱诊断标准

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

实时荧光PCRreal-timePCR

实时荧光聚合酶链反应。

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到设定的阔值时，所经历的循环数。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid)

FAM：6－羧基荧光素（6-carboxyfluorescein)

IV

VIC：琥珀酰亚胺酯

CY5：磺酸基-CY5羧酸

LDC：赖氨酸脱羧酶（LysineDecarboxylase)

MAC：麦康凯琼脂（MacConkeyAgar)

NB：营养肉汤（NutrientBroth)

NP-40：乙基苯基聚乙二醇（NonidetP-40)SC：亚硒酸盐胱氨酸（SeleniteCystine)

Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase)

TSI：三糖铁琼脂（TripleSugarIronAgar)

UNG酶：尿嘧啶DNA糖基酶（UracilDNAglycosylase)

BS：亚硫酸铋琼脂

XLD：木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（Xylose-LysineDesoxycholate)

TCBS:硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂

4原理（方法）

筛查试验

依据核酸体外扩增基本原理，针对伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌、霍乱弧菌、志贺氏菌和痢疾阿米巴

特异靶基因序列设计引物、荧光标记探针，在PCR反应过程中，当荧光信号达到并超过所设定的阈值

时，利用荧光信号强度与PCR产物量的正相关关系，即可对PCR结果进行分析和判定。

对标本的模板DNA进行实时荧光PCR扩增，根据其Ct值及扩增曲线进行标本结果报告，当

PCR结果呈阴性时直接报告阴性结果；当PCR结果呈阳性时，进一步对阳性标本做确诊实验。从而

实现对从业人员健康检查粪便标本中的伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌、霍乱弧菌、志贺氏菌和痢疾阿米巴

的快速筛查。

确证鉴定

确证鉴定的基本原理，是通过增菌、分离、生化和血清学鉴定等方法，从PCR阳性标本中分离得到

目标致病性微生物。确证鉴定结果为阳性时报告阳性（检出），为阴性时报告阴性（未检出）。

5设备与材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备材料如下

生物安全柜。

高速离心机