高效液相色谱分析(福建师范大学).ppt

第三章

高效液相色谱分析;教学目标及要求：

1.掌握液相色谱的特点；

2.掌握液相色谱法的分类；

3.了解影响液相色谱峰扩展及色谱别离的因素；

4.理解液相色谱别离的原理；

5.了解液相色谱的固定相和流动相；

6.了解液相色谱仪的组成和结构原理及主要部件；

7.了解液相色谱别离类型的选择；

8.了解液相色谱的应用。

教学重点、教学难点：

1.高效液相色谱与气相色谱的异同点

2.高效液相色谱速率理论方程式在实验条件优化中的应用

3.别离柱和流动相的选择和匹配

4.不同种类液相色谱别离的原理上的差异;第一节高效液相色谱法概述

Generalizationofhighperformanceliquidchromatograph;高效液相色谱法：以液体作为流动相的色谱法。它是在经典液相色谱实验根底上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压输液泵，高效固定相和高灵敏的检测器，而开展起来的快速别离分析技术。具有别离效能高，检出限低，操作自动化和应用范围广的特点。;(一)、HPLC与经典LC区别;(二)、HPLC与GC异同点;流动相差异

GC：流动相为惰性气体

组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用。

HPLC：流动相为液体

组分与流动相和固定间有亲合作用力，为提高柱的选择性、

改善别离度增加了因素，对别离起很大作用。

流动相种类较多，选择余地广

流动相极性和pH值的选择也对别离起到重要作用

选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相

可以增大别离选择性;二、液相色谱仪器

highperformanceliquidchromatograph;液相色谱仪〔1〕;液相色谱仪〔2〕;液相色谱仪〔3〕;液相色谱仪〔4〕;美.瓦里安Prostar210高效液相色谱仪;三、高效液相色谱法的特点和应用;四、流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC;2.主要部件P83;(2)梯度淋洗装置;2024/5/19;(3)进样装置;(4)高效别离柱;理想的HPLC检测器应具有如下特性：

???

第一，具有高灵敏度和可预测的响应；

第二，对样品所有组分都有响应，或具有可预测的特异性，适

用范围广；

第三，温度和洗脱液流速的变化对响应没有影响；

第四，响应与洗脱液组成无关，因此可作梯度洗脱；

第五，死体积小，不造成柱??谱带扩展；

第六，使用方便、可靠、耐用，易清洗和检修；

第七，响应值随样品组分量的增加而线性增加，线性范围宽；

第八，不破坏样品组分；

第九，能对被检测的峰提供定性和定量信息；

第十，响应时间快。;分类标准;按

测

量

原

理

分;a.紫外检测器

应用最广，对大局部有机化合物有响应。

特点：

灵敏度高；

线形范围高；

流通池可做的很小〔1mm×10mm，容积8μL〕；

对流动相的流速和温度变化不敏感；

波长可选，易于操作；

可用于梯度洗脱。

;b.光电二极管阵列检测器;2024/5/19;光电二极管阵列检测器;c.示差折光检测器

〔differentialrefractiveindexdetector〕;示差折光检测器;d.荧光检测器

〔fluorescencedetector〕;一、液-固吸附色谱

liquid-solidadsorptionchromatograph

二、液-液分配色谱

liquid-liquidpartitionchromatograph

三、离子交换色谱

ion-exchangechromatograph

四、离子色谱

ionchromatograph

五、离子对色谱

ion-pairchromatograph

六、排阻色谱

size-exclusionchromatograph

七、亲和色谱(AC)

Affinitychromatograph;一、液-固吸附色谱

liquid-solidadsorptionchromatography;二、液-液分配色谱

liquid-liquidpartitionchromatography;固定相有机基团主要有三类：

1.疏水基团:如不同链长的烷烃〔C8，C18，C6等〕。

2.极性基团：如丙胺基，氰乙基，醚和醇等。

3.离子交换基团：如作为阴离子交换基团的胺基，季铵盐。作为阳离子交换基团的磺酸基等。;三、离子交换色谱

ion-exchangechromatography;流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作