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3.2基因工程的基本操作程序;一、目的基因的筛选与获取;一、目的基因的筛选与获取;提取某种生物的全部DNA;某种生物的单链mRNA;PCR(聚合酶链式反应);PCR(聚合酶链式反应);PCR(聚合酶链式反应);PCR技术与DNA复制过程比较;思考·讨论;知识回顾;【课堂练习】设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图),请分别说明理由。;【课堂练习】设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图),请分别说明理由。;PCR中的数量关系;探究·实践DNA片段的扩增及电泳鉴定;(4)如何对PCR产物进行鉴定?;琼脂糖凝胶电泳演示实验;制备凝胶;P85·1.你是否成功扩增出DNA片段?判断的依据是什么?;1.为避免外源DNA等因素的污染,PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌处理。
2.该实验所需材料可以直接从公司购买,缓冲液和酶应分装成小份,并在-20℃储存。使用前,将所需试剂从冰箱拿出,放在冰块上缓慢融化。
3.在向微量离心管中添加反应组分时,每吸取一种试剂后,移液器上的枪头都必须更换。
4.在进行操作时,一定要戴好一次性手套。
5.PCR扩增不能随意加大试剂用量。;二、基因表达载体的构建(基因工程的核心);启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比;二、基因表达载体的构建(基因工程的核心);(1)原核生物基因;1.若无法获得该蛋白,原因可能是什么?
2.以上情况如何解决?
3.若可以获得该蛋白,但是蛋白质无活性,原因可能是?
4.以上情况如何解决?;P80旁栏思考:将生物的所有DNA直接导入受体细胞不是更简便么?如果这样做,效果会怎样?
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