3.2 基因工程的基本操作程序（含视频）（教学课件）-高中生物人教版（2019）选择性必修3.pptxVIP

第三章基因工程第2节基因工程的基本操作程序（1）从社会中来1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么吗？转基因抗虫棉非转基因抗虫棉培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤？基因工程的基本操作程序课P76目的基因的筛选与获取基因表达载体的构建（核心）将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定抗虫棉的培育过程课P76P293（1）目的基因：预期表达产物①概念：用于改变_______________或获得_______________等的基因。受体细胞性状主要指编码蛋白质的基因。目的基因的筛选与获取1与生物抗逆性相关的基因（Bt抗虫基因）与优良品质相关的基因与生物药物和保健品相关的基因（胰岛素、干扰素基因）与毒物降解相关的基因与工业用酶相关的基因等②实例：（2）筛选目的基因的方法：课P76P293①较为有效的方法：从相关的__________和____________的基因中进行筛选。②实例：已知结构功能清晰苏云金杆菌（Bt）制成的生物杀虫剂广泛用于防治棉花虫害苏云金杆菌的杀虫作用与Bt基因有关Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因掌握了Bt基因的序列信息对Bt基因的表达产物-Bt抗虫蛋白有较为深入的了解：在某类昆虫肠道的碱性环境中表现毒性，对人畜无影响（2）获取目的基因的常用方法：●从基因文库中获取课P77●利用PCR获取和扩增目的基因概念：PCR是__________________的缩写，它是一项根据___________________的原理，在体外提供________________的各种组分与反应条件，对_________________________进行大量复制的技术。DNA半保留复制聚合酶链式反应目的基因参与DNA复制的核苷酸序列PCR扩增仪①全称：②原理：③操作环境：④目的：聚合酶链式反应DNA半保留复制体外（PCR扩增仪/PCR仪）对目的基因的核苷酸序列进行大量复制DNA的复制视频讲解子链(新合成的链)母链(模板链)3’5’5’3’DNA聚合酶解旋酶四种脱氧核苷酸5’3’模板：原料：3’5’能量：酶：回顾：体内DNA复制(1)特点:半保留复制、边解旋边复制DNA的两条链4种游离的脱氧核苷酸(2)条件:ATPDNA解旋酶、DNA聚合酶等(3)复制原则:碱基互补配对原则（A与T、C与G配对保证复制的准确进行）dATPPCR反应体系需要的条件DNA模板四种脱氧核苷酸(dNTP)引物（2种）稳定的缓冲溶液（一般添加Mg2+）耐高温的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）①DNA模板（需含有目的基因）。②四种脱氧核苷酸（或四种dNTP：dATP、dTTP、dGTP、dCTP）。③分别与模板DNA相结合的2种引物。④耐高温的DNA聚合酶(Taq酶）。⑤稳定的缓冲溶液（一般添加Mg2+）。⑥能严格控制温度的温控设备。激活真核细胞和细菌的DNA聚合酶注意：DNA的两条链是反向平行的，为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA有羟基（-OH）的一端称为3’端，而没有羟基的一端称为5’端。DNA的合成方向总是从5’端到3’端延伸。3’5’在DNA复制时，DNA聚合酶不能直接从模板链的一端直接开始合成子链，必须由引物提供3’端之后才能开始连接脱氧核苷酸。一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸（通常为小的单链RNA）PCR和DNA的体内复制是否完全相同？5’3’利用PCR获取和扩增目的基因dNTP和ATP类似,不但可以提供原料还可以提供能量。2.DNA体外复制（PCR）的条件：体内DNA复制参与的组分在DNA复制中的作用PCR中参与的组分解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶（变性）打开DNA双链无需解旋酶，用高温(90℃以上)代替DNA模板(含目的基因的DNA片段)提供DNA复制的模板4种脱氧核苷酸(dNTP)合成DNA子链的原料耐高温的DNA聚合酶(Taq酶）催化合成DNA子链使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸2种引物(常为小的单链DNA，通常为20-30个核苷酸)引物PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行提供相对稳定的pH环境；一般添加Mg2+，真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活。一.目的基因的筛选与获取——脱氧核苷三磷酸~~腺嘌呤在PCR过程中实际加入的为dNTP（即dATP、dGTP、dTTP、dCTP），既可作为合成DNA子链的原料，又可为DNA的合成提供能量。PPP脱氧核糖腺苷（A)腺嘌呤脱氧核苷酸OHHdADPdATPDNA母链1DNA母链1引物25’5’3’3’3’5’3’5’5’5’3