2025届高三生物一轮复习第54讲：基因工程的基本工具和基本操作程序.pptxVIP

第54讲;;;1.基因工程概述;基因工程的理论基础;2.重组DNA技术的基本工具

(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”);①将一个基因从DNA分子上切割下来需要切两处，同时产生四个黏性末端或平末端。

②限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。;(2)DNA连接酶;①DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。

②DNA聚合酶起作用时需要以一条DNA链为模板，而DNA连接酶不需要模板。;(3)载体;情境推理;(1)请用图示法写出限制性内切核酸酶Ⅰ和限制性内切核酸酶Ⅱ切割后形成黏性末端的过程。

限制性内切核酸酶Ⅰ：;(2)切割图示中的目的基因和质粒应选用哪类限制酶？请说明理由。

用限制酶Ⅱ切割目的基因，用限制酶Ⅰ切割质粒。

限制酶Ⅰ的识别序列包含限制酶Ⅱ的识别序列，因此限制酶Ⅱ也可切割限制酶Ⅰ的位点，故使用限制酶Ⅱ时，可在目的基因两端同时作切割，从而切出“目的基因”，但若使用限制酶Ⅱ切割质粒，会同时破坏质粒中的两个“标记基因”，故只能使用限制酶Ⅰ切割质粒。;1.限制酶的选择原则;2.标记基因的作用

标记基因可用于检测目的基因是否导入受体细胞：;考向结合基因工程的基本工具，考查科学探究

1.(2023·新课标卷，6)某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具，将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。;C;B;3.(2021·全国乙卷，38)用DNA重组技术可以赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人类需要的生物产品。在此过程中需要使用多种工具酶，其中4种限制性内切核酸酶的切割位点如图所示。;(2)DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是。

(3)DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征。如质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能；质粒DNA分子上有，便于外源DNA插入；质粒DNA分子上有标记基因(如某种抗生素抗性基因)，利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞，方法是_____________________________________________________________________

_________________________________________________________。;(4)表达载体含有启动子，启动子是指___________________________________

___________________________________________________________________。;基础·精细梳理;1.目的基因的筛选与获取;(2)利用PCR获取和扩增目的基因;(2)利用PCR获取和

扩增目的基因;(2)利用PCR获取和扩增目的基因;①在PCR过程中实际加入的原料为dNTP(即dATP、dGTP、dTTP、dCTP)，既可作为合成DNA子链的原料，又可为DNA的合成提供能量。

②引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸，作为新子链的合成起点，只能结合在母链的3′端，使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。

③复性温度过高，则引物难以与模板链结合，温度过低则易使两条母链配对结合，均无法获得PCR产物。

④真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2＋激活。因此，PCR反应缓冲液中一般要添加Mg2＋。;2.基因表达载体

的构建——核心;2.基因表达载体

的构建——核心;启动子、起始密码子、终止子、终止密码子的区别

;3.将目的基因导入受体细胞 只有该步骤没涉及碱基互补配对原则;(1)农杆菌特点

①能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。

②农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T--DNA转移到被侵染的细胞中，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。

(2)农杆菌转化法中的两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上，第二次拼接(非人工操作)是指插入目的基因的T--DNA拼接到受体细胞的染色体DNA上；两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒导入农杆菌，第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的T--DNA导入受体细胞。

(3)导入的目的基因，可能存在于细胞质中，也可能整合到染色体DNA上。存在于染色体DNA上的目的基因有可能通过花粉传播进入杂草或其他作物中，造成“基因污染”。;4.目的基因的检测与鉴定;1.设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(